近日见了15版药典的意见征询稿，无菌项检查大改，抓紧整理与自家相关的东西。
d6 g1 j3 ?5 p9 A* `5 s
' W+ q" \7 u; a, w* {' L1.改良马丁培养基改为胰酪大豆胨液体培养基（TSB）
6 }2 a, ~$ Q- z+ S" M0 ` r; z10版：硫乙醇酸盐流体培养基主要用于细菌培养，改良马丁培养基适用于真菌培养。
- a7 u5 l1 Z" u3 r0 Y/ w15版：硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌培养，TSB适用于真菌和需气菌培养。
$ W& l" ]6 f. F/ e
专家们终于知道培养需气菌是TSB比硫乙醇酸盐流体培养基管用了，就我感觉改良马丁培养基都比硫乙醇酸盐流体培养基管用，只是这么明改太坍台了，干脆扯个TSB出来——人家是国外进口的，欧典美典的要求吧。
不过根据经验，TSB养起真菌来未必有改良马丁培养基管用，毕竟含糖量少。白色念珠菌在TSB里就不如改良马丁培养基生长迅速（众专家怒：真菌又不是只有白念一种！）。
7 S6 s; F1 d/ H$ t3 @1 ~! s
随着TSB“功能设定”的登场，再看看灵敏度检查与方法学验证（又称方法适用性试验）修改如何。二、三部药典无菌附录已合并。
* [. u! J* \! e6 i灵敏度检查
10版：硫乙醇酸盐流体培养基（金黄色葡萄球菌/铜绿假单胞菌/枯草芽孢杆菌/生孢梭菌）30-35℃，改良马丁培养基（白色念珠菌/黑曲霉菌）23-28/20-25℃。
15版：硫乙醇酸盐流体培养基（金黄色葡萄球菌/铜绿假单胞菌/生孢梭菌）30-35℃，TSB（枯草芽孢杆菌/白色念珠菌/黑曲霉菌）20-25℃。
方法学验证：15版：以上，改铜绿假单胞菌为大肠埃希菌。
# @4 c6 _2 h2 {# q' C
质疑ing~~
培养温度统一了二、三部药典，只是为啥跟随10版三部药典的脚步呢？我这边大部分无菌检查样品是二部的。
这硫乙醇酸盐流体培养基真心是“主要用于”厌氧菌培养基的吗？我怎么觉得“30-35℃”培养细菌是它的主要功能呢！
这TSB真心是“适用于”需气菌的吗？他们也就只敢丢个不挑剔温度的枯草过来做灵敏度，你要是丢个金葡铜绿过来，我看20℃它们长不长！
! ^9 g5 j2 m# ^# f; p2 v- y# I9 h
现下用于药品无菌的两培养基批批灵敏度检查了，枯草白念黑曲在TSB那儿又经历过多次无菌灌装验证用培养基的折腾，所以对于灵敏度检查来说，依然都是浮云。
但方法学验证就不是浮云了，所谓“方法学”，还得沿袭着看下去，这检验量或许也有更改呢。
5 X! f9 m% T' s4 V- s) T话说三部药典的无菌方法学验证菌种是这样子进化的：
05版三部（≠任何二部）：乙型溶血性链球菌、短小芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌
10版三部（＝05版二部）：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌
15版三部（＝10/15版二部）：金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌
——我就说10版三部跟随05版二部，却不跟随10版二部，是个天大的笑话。
1 ~8 W* U$ i' i# _1 u1 z9 B2.菌液扩增培养基的修改
1 W7 ?, S5 S2 A X' l0 q9 N0 Y营养肉汤（NB）改为TSB，用于扩增金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌。
改良马丁培养基改为沙氏葡萄糖液体培养基（SDB），用于扩增白色念珠菌。
改良马丁琼脂改为沙氏葡萄糖琼脂（SDA），用于生产黑曲霉菌的孢子。
: K( ~ f* h& _% Q' Y# \9 n; w
这怎么看怎么别扭，TSB只需要检测枯白黑的灵敏度，却在这儿带着“我用于扩增细菌”的招牌，养起金铜大枯。混乱中。
) b1 n, {+ W5 J) ^8 v) z& L
可为什么抛弃NB了呢？难道不能不指定扩增培养基，或加个推荐性的“如”字？让检测人员自行选择不成么？——有些菌我是倾向于用NB扩增的，不含糖，菌液均匀稳定，稀释梯度易估算；那TSB会使某些菌（比如铜绿最明显）爆发生长。再说NB是不会被逐出微生物实验室的，菌种保藏得用NB，TSB的糖会坏事。
) ~) O1 I7 c' ~+ ]6 H* L6 P( |
生孢梭菌忠贞不渝地选择硫乙醇酸盐流体培养基，只是计数方法，药典依然没有明示。
9 z8 \2 y0 M1 _3 |0 S( L白念黑曲用沙氏葡萄糖系列我倒可以理解，这培养基增真菌的速度不亚于改良马丁培养基，看来后者是要被淘汰了。
8 |$ E( c) l T+ M2 P- q6 ~' o
3.稀释液冲洗液种类的增加
; [4 A& s8 ], J, c
高兴地说，生理盐水终于被15版药典认可，能够光明正大被推荐作为稀释冲洗液了，这是借了三部药典合并的光环吧。
; ]* G" F- A% D4.生物制品无菌检查依然两份的硫乙醇酸盐流体培养基
- \' r- g: x6 w; j% V- H5 U' H
一般样品：1份硫乙醇酸盐流体培养基30-35℃+1份TSB20-25℃
生物制品：1份硫乙醇酸盐流体培养基30-35℃+1份硫乙醇酸盐流体培养基20-25℃+1份TSB20-25℃
; |) `- X" _* H! \9 n
555，还是不改啊，这可牵涉到方法学验证，那儿说“置规定温度培养3-5天”，这“规定温度”到底是指灵敏度检查中指定各菌生长的“规定温度”？还是无菌检查中指定各份滤器培养的“规定温度”？
) M2 c5 e4 O6 D* V6 t话说真要是测试“样品+硫乙醇酸盐流体培养基”的金黄色葡萄球菌/铜绿假单胞菌/生孢梭菌20-25℃，长不了的吧。
另好事哪个厌氧微生物非要20-25℃的硫乙醇酸盐流体培养基才能长出来……
; W$ k! i9 C1 d. N5 h
5.阳性对照的具体操作
* `$ Q% G! N# I
15版：“……无抑菌作用的供试品，以金黄色葡萄球菌为对照菌；……供试品用量同供试品无菌检查时每份培养基接种的样品量。阳性对照管培养48-72小时应生长良好。”
- H+ x" N: R/ i
就这么多，既不明说多出来的那一份阳性对照该是用（跟随金葡菌灵敏度的）硫乙醇酸盐流体培养基，也未明示阳性对照管该放置于（跟随金葡菌灵敏度的）30-35℃培养。更不说这阳性对照操作是无菌当日，还是允许14天后进行。——你们这算是药典的艺术么？
# q3 b' ]; b/ l$ e
还有，生物制品若失去了“可14天后接种阳性对照”的特权，无菌当日，一次四个集菌培养器？有卖不？还是用两组两联体？
2 s/ h$ B- f4 v- g/ g1 }
嗯，有一种最坏的理解：你这不是金葡么，你这不是两份跟随金葡的硫乙醇酸盐流体培养基么？你金葡的阳性对照做两组两个温度！！！——我保证第一个喊冤的不是我，“每份培养基接种的 样·品·量”绝对会让领导们心痛的~~
+ V7 h- q/ \& ?0 n. ?+ R0 j: \6.上市抽验样品的最少检验数量
* S5 i" w% Z6 d/ I: K6 ~
表1《出厂产品最少检验数量》核对过了，未修改。上市抽验是表2，我们这儿适用于进厂物品的无菌抽样量计算。涉及到无菌包材和甘露醇。
500ml规格的液体制剂从6个改成了10个，开的甘露醇瓶数更多了。
* p; B4 A4 r; Q1 u$ J
“医疗器具”10版的表2是没有的，我一直按着《GB-T 14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法 第2部分 生物学试验方法》的规定鬼混。这下15版明确了，医疗器具 供试品最少检验数量是10，若供试品每个容器内的装量不够接种两种培养基，那么表中的最少检验数量加倍。——就是说注射器/胶塞/助力器/无菌针/无菌袋这些结合表3“每支供试品接入每种培养基的最少量是 整·个·器·具”，一次无菌检验量是直接接种法的10+10+1=21了喽。
A* O0 \5 [. A! a/ \& N7.供试品的最少检验量
; d$ D) [/ R- S' m- ?% M0 J最天雷的表3来了，什么培养基种类，什么菌种归属，这个表一出，成本刷的就窜上去了。
^2 m+ d# [ u, v
就看与我们产品相关的几列。
9 J6 e% Z2 ]0 i0 _! B0 f" ]1 u& [
供试品装量V≤1ml，全量。——这条没有争议。直接接种法41支，薄膜过滤法60支，生物制品这规格范围的我们没有。
" K. C* @$ `3 L6 f$ ]10版（二部）
1＜V＜5， 半量
5≤V＜20， 2ml
20≤V＜50，5ml
6 X8 r; H- m' D) J) e* e10版（三部）
1＜V≤5， 半量
5＜V＜20， 2ml
20≤V＜50，10ml
0 T) C' _! s9 J; [2 A' u+ @15版
1＜V≤40，半量，但不得少于1ml
! @! d3 }6 R: P9 i& a! l0 O这是神坑啊，以10ml装量举例，20支最少检验数量已定，按着10版，这10ml最多可以供给5份培养基（每份培养基索取2ml），就算要使3份集菌器+2份阳性对照也够了；到了15版，10ml只够给两份培养基，非生物制品，抽30支，生物制品，抽40支。
. Y. k9 z7 F, h2 d- W. t- I哦，易溶的样品做时倒无所谓，40个，无非是时间长点罢了。若是大规格的凝胶呢？稀释液体积成倍翻上去，我给算算：
$ ?9 R6 b" C" z G1 S, k, @20ml凝胶，6mg/ml，需稀释到1mg/ml过滤，30瓶*20ml*6体积稀释液÷3集菌器=1200ml——一张膜不是只允许过滤1000ml的么？死路中。
: {$ A; `8 ]4 B+ `4 [. I: |
要不继续直接接种法？翻去看，忽然觉察了15版这么改的阴谋！
+ q0 c9 \- g& r7 c直接接种同理要求半量，又有接种样品体积最多为培养基体积10%的规定，那么20ml规格，直接接种的每种培养基是：20瓶*10ml半量*10倍=2000ml，要配好多培养基呀，于是大家都会倾向于薄膜过滤了是不？那才100ml滤筒。
# ]) U C% G. ?4 |
我服了你们成不？
我用酶去，哼！
; ^. `# Q: E b& c2 ~" j ]窃以为这个规定不一定行得通，我这儿的产品只是黏稠难滤需要稀释而已，其他药品呢？那些抑菌作用强的，好不容易驯化了一个合适的中和剂，你这一规定，样品量加上去，中和剂也跟着加，这方法适用性试验可有的头疼了。
) e" {- N( f+ I! o8 b' r等最终版的定稿。
# ^ p" g+ Y) U, |+ d4 z# K
8.改版定稿后需做的事情
. v# M) a+ ~" x' K0 l9 l2 f" n
（1）把无菌灌装验证用TSB尽量与无菌检查用TSB归在一个批号，方便管理。
7 A7 v4 ~4 O* @/ `
（2）现在开始如果要买改良马丁培养基，切记不可买多了。
3 _7 ^" \0 @7 v8 P+ K（3）灵敏度检查重做。
4 u x, q/ I$ ?& L1 c# d* Q（4）Z产品2ml、2.5ml、3ml，E成品5万（=10ml）、其他效价（如果有的话），E半成品，E稀释液10ml、其他体积（如果有的话），Y原料药，N产品眼科，以上这些，方法适用性试验重做。也别省略什么菌了，我可不想去个药检所提供的报告是补充版的补充版，全体过一遍。
9 V5 R( N- p5 D# G) [. h- D- x至于N产品的外科，方法学肯定也同上一起做了。可到底是直接接种法还是薄膜过滤法呢？前者的接种量会让培养基泛滥，后者的接种量必定要用酶，等着15版定稿再说。纠结的大规格，万一哪日它大到100ml去了怎办……
" S/ K- y1 K2 n/ e
2014.5.13
|手机版|药群论坛
( 蜀ICP备15007902号 )
收藏
支持
反对