对照品含量/对照品用途纯度与含量要求

天然产物中成分复杂，常有同系物或异构体存在，因之要对其化学结构加以确证，如测定熔点、红外、紫外、核磁、质谱……等至少三个数据，并与已知文献核对，如无文献依据，则可按未知物对待，分析各种光谱图及有关参数，应与所需求的化学物质吻合。
# G/ s. N5 N9 v9 |& Y& m　　纯度与含量：纯度检查指对照品以外的杂质多少，而含量指对照品本身的含有数量，杂质高，纯度低，而含量相应也低，二者有相关性，但含意不同。作为对照品的纯度与含量要求均比较严格，但由于个别品种在天然药物中含量低，提取分离特别是精制难度大，影响提供数量或成本高、根据不同的用途，如鉴别用、杂质检查用、含量测定用，其纯度与含量要求可暂允许以适应于既定的目的为原则。
　　一、鉴别用：首先根据所制定的质量标准中使用的鉴别方法检查其纯度，如用为薄层鉴别，相应的对照品也选用薄层色谱法来考察纯度，90版药典收载的水杨酸甲酯、冰片、樟脑等为伤湿止痛膏气相色谱鉴别用，则用气相方法考察。杂质的出现与样品量密切相关，有些文献记述所用对照品系色谱纯或呈一斑点，并未提及样品量，可信性差，薄层鉴别用对照品至少应按标准中采用方法数倍量点样，要求检不出杂质点，并按20－100μg梯度点样得出色谱，便于了解纯度情况并存档备查。www.gjbzwz.com除上述外要求用二个以上组分（含二个）差异较大的溶剂系统或不同层析条件，对检样进行分析，以监测杂质情况。同时尽可能用色谱法做归一化法测定，采用薄层扫描法时点样100μg，高效液相或气相色谱法进样10－20μg，视与杂质分离度而定，后二者从对照品出峰时间计，观察时间再延长1－2倍量计。应附相应图谱。
　　二、杂质检查用：中国药典1990版一部收载制川乌需检酯型生物碱，以乌头碱汁；同版二部收载盐酸小檗碱中检巴马汀及药根碱等，杂质检查用对照品纯度要求除做薄层检查外还必须做色谱归一化法测定，并尽可能做含量测定。杂质检查用对照品的纯度越低，测得结果偏高。如药典规定盐酸小檗碱点6μg如出现药根碱不得比0.3μg斑点深。即不得超过5％，点30μg盐酸小檗碱中出现巴马汀斑点不得比0.6μg深，即不超过2％。（如上例，药根碱纯度如为80％，盐酸小檗碱点样6μg，实则出现药根碱不得比0.24μg（0.3μg×80%）班点深，即不得过4%），含量限度参见含量测定用对照品项下，要求基本相同。
　　三、含量测定用：A、由于中药化学对照品多由有机溶剂中提取或精制，故一般水分很低，而按常规水分测定法需样量较大，因此目前没有规定水分含量，只是在标定时对熔点较高性较稳定者可置105℃干燥；对不稳定品则可置硅胶或五氧化二磷真空干燥器中干燥后应用。严格说对照品应规定干燥失重限度，对残留有机溶剂也应有所规定。
# ?; A! b( e1 q% ]　　B、对照品的含量及杂质量的测定方法，过去标化对照品时要求采用不需要对照品的经典方法如容量法、重量法等，也有用紫外E值测定的，由于近代科学发展，尤其是光谱色谱技术的广泛应用，而上述容量、重量法只能得到如总生物碱、总黄酮等大类总成分含量，而现在可用高效液相法、薄层扫描法等专属灵敏的方法，一般能得到相对准确的结果，但也应该指出这只能对与对照品具相同性质即如对显色剂或测定波长等具相应响应值的同系物杂质分离后得到的含量，如杂质为对该显色剂不显色或对测定波长无响应的，以及对照品中含有的水分及无机物影响等则不能检出。
( u7 I+ C8 [3 Z　　也可用相溶度分析和差示扫描热量法等，均为根据热力学性质而设计的方法。www.gjbzwz.com相溶度分析法可检出包括异构体的杂质量，差示扫描热量法是测定物质熔融热，因杂质存在可发生变化，从而测得对照品的纯度，但不能用于熔融时分解的物质。其它如紫外、红外、核磁共振、原子吸收等光谱方法、旋光法、电泳法、极谱法，也可根据试样情况而选定，也不完全排除采用容量法或重量法等。
. v$ N* i) c) Z, w. a# B　　关于光谱或色谱法本身要求有对照标准，可采用国际化学对照品对比，如无权威性对照品则需小量精制纯度较高的物质作对照品应用，称为原始对照品。
$ C3 p! v2 w/ ?$ T6 f1 `% s　　在新药研制中，有些含量测定方法采用了药典收载的鉴别用对照品，应该按含量测定用对照品要求作纯度与含量考察，如符合要求可以采用，如纯度差应经精制后选用，如在检验方法研究中只要杂质峰不干扰测定可以暂用，但如制定标准限度，必须确切了解对照品的纯度与含量。
& X$ d: {3 `% c' N" @- a　　C、限度要求合成品原则上要求99％以上，自天然药物中提取的对照品含量，要求在98％以上，个别的可在97％以上。如在90～97％者可以暂时乘以因数折算使用，但在申报生产用质量标准或最迟必须在标准试行期满前使对照品达到含量测定用要求，方可转为部颁标准用对照品。含量低于90％者，一般不可作为定量对照品应用。杂质检查用对照品含量限度要求基本与含量测定用对照品相同。
8 W( U! z! V0 u% e: N% ~　　四、校正仪器用：如熔点对照品，即校正温度计用。纯度与含量要求与含量测定用对照品相同。
　　含量测定用的对照品保存和使用方面的信息， 笔者认为跟不上实践的需要。在目前标准起草与对 照品供应相分离的情况下，对照品的保存和使用应 有更具体的指导性规定。本文分3类谈谈自己的思 考。
　　第一类，化学对照品，胶塞小瓶分装，含量按 100％ 计，干燥失重在0．2％ 以下，用前不需干燥¨ 。 这类对照品在使用说明书上一般规定为遮光及密闭 保存。考虑到胶塞可能会渗透水分，不同的保存条 件，很可能造成含水量不同。在高温地区或高温季 节，对照品通常会放入冰箱冷藏，以防变质：当x,-JN 品从冰箱取出后，由于温度的差异，www.gjbzwz.com水分可能会冷凝 在x,-JN品里。为避免这种情况的发生，笔者认为可 以在对照品取出后立即放入干燥器中，待温度趋于 平衡后再称定重量。
　　第二类，化学对照品，分装和含量同第一类，干 燥失重比较大，用前应在适当条件下干燥 目前对 干燥条件的规定并不统一，相同对照品在不同的质量标准中，其处理条件不尽相同。如吗啡，《中国药 典>2000版二部收载有105 cc干燥2 h(阿片)、105 o【=干燥1 h(盐酸吗啡片)和80cc干燥至恒重(盐酸 吗啡缓释片)3种方法。又如对乙酰氨基酚，在酚咖 麻敏胶囊 中规定的方法是105 cc至恒重，而对乙 酰氨基酚咀嚼片和对乙酰氨基酚凝胶 却未要求 干燥。对照品用前处理方法的不同将可能影响含量 测定的结果，文献一 指出地塞米松磷酸钠在两种条 件下干燥导致结果相差2％ 。这样的状况对标准的 正确执行是很不利的。
6 X  D8 ?% P/ B2 ]" P0 |! Y& i6 V　　对于干燥的条件，目前仍以常压105 cc居多， 《中国药典>2000版二部共有32个对照品采用这一 条件，另外使用减压干燥的只有16个。鉴于减压技 术不断成熟，其高效、节能及破坏性小的优点日益突 出 j，未来的实验可以更大程度地探索以减压干燥 为主的温和条件。
! X4 j# |$ w$ H# _; k% ~　　第三类，中检所编写的《抗生素标准物质使用 手册》所列品种。此类x,-}-N品的保存和使用方法的规定比较明确。该手册规定：“于5 c【二以下低温避 光保存，开启安瓿后严密保持干燥以防吸水”，“用 前不需干燥”，“更换新批号时，旧批号一律停止使 用”。该手册还规定了此类对照品储备液的保存条 件和使用期限。近年来新增加的品种(如克拉霉 素、阿奇霉素、头孢克洛)，以及原来的暂行对照 品现改为化学对照品的(如头孢拉定、克拉维 酸)，其保存和使用方法是否改变，未见补充说明 的资料。
　　含量测定缺乏专属性<BR>关于含量测定，并非每个药品都需用专属性好的方法，由于化学原料药大多数是单一的较纯物质，并在检查项下已对其主要杂质进行控制，因此健全而精确的方法较专属但精确性较差的方法为好，欧洲药典也认为如果鉴别和纯度实验已能充分反映被测物质的特性和品质，那么分析方法的精确性就成为选择含量测定方法的最主要依据，因而UV法常被国内外药典应用。但有的药品含量测定，却必须注意方法的选择性，特别是许多性质不稳定的抗生素含量测定。例如中国药典1995年版头孢拉定采用HPLC法，这是由于头孢拉定的环己二烯基团在氧气和水分的作用下易氧化为苯基而成为头孢氨苄，微量金属如铁也能加速这种反应，所以头孢拉定中不可避免地存在有头孢氨苄，且其含量不可忽视。药典中头孢拉定原料中头孢氨苄控制在5.0%以下，制剂控制在7.0%以下就是这个道理。但有文献却采用UV法监测头孢拉定半成品的含量，由于UV法选择性差，测定的只能是头孢氨苄和头孢拉定及其它相关物质的总和，www.gjbzwz.com头孢氨苄的最大吸收波长为262 nm，吸收系数为220～245，头孢拉定最大吸收波长为261 nm，吸收系数为215～240，两者基本相同，当头孢拉定降解而含量不合格时，UV法不能反映头孢拉定中头孢氨苄的变化。中国药典中对头孢拉定及其中所含头孢氨苄均有限度要求，而UV法既不能准确反映头孢拉定的含量，又不能反映头孢氨苄的含量，因此UV法监测头孢拉定制剂含量是不可行的，可能会使不合格的产品得不到控制而造成重大损失，这也是我们在实际检验中遇到的问题：头孢拉定原料中头孢氨苄含量一般较低，约2%，但由于贮藏或生产工艺不当，其制剂中出现头孢拉定含量低于药典限度或头孢氨苄含量超过药典限度的情况。部标准中肌苷制剂的含量测定也存在同样的问题。
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