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[化学分析] 液相进样针数

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楼主
毛毛 发表于 2017-3-29 10:49:30 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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一、含量方法学研究所需图谱(流动相、检测限和定量限参照有关物质,如有关物质和含量方法一致,可以只做进样精密度、溶液稳定性)
* \# _* V# V/ Q( U' P# g1 m1、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r.0.999。
1 i" t* @) P( k1 i+ D2、进样精密度:用对照品做,单样连续进六针,要求RSD<2.0%。& @0 w* {% o) t3 l  a4 x. |
3、重复性试验:双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<2.0%。  U: I/ r+ c1 ~% D
4、回收率(准确度):总共22针,分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在98%~102%之间,RSD<2.0%。' M0 z' r6 i9 K7 |, _5 m( T/ c
5、含量测定:总共28针,方法验证—两个对照品四针,仿制品两个样四针,小试样品两个样四针。中试样品三批—两个对照四针,一批双样四针,三批六个样十二针。
5 c& X8 F9 V; b6、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。
( V0 H  y  T; K) A7、专属性:空白辅料、空白溶剂、正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。$ [+ E7 }8 M" i6 `$ b. e
8、稳定性试验:包括加速0、1、2、3、6月30、40℃,长期3、6、9、12、24月,均做含量测定和有关物质。含量测定双样双针,一样两针,一批两样,三批六样十二针,两个对照四针。有关物质做空白  v- B- {/ l& N0 l& G
溶剂,单样单针,100%样品、1%自身对照,共七针。( V2 C- p" h: X0 h8 E8 M# Y1 g
二、有关物质方法学研究所需图谱8 i& a3 z3 a4 L* L  D+ \& M; W
1、波长扫描和流动相的选择:参照国家标准并根据欧洲药典、USP英国药典以及日本药典中收载的流动相做,取样品,配成一定浓度进样,进行比较确定,选取其中最合适的。确定流动相后,并驱样品、对照品以及国外上市样品,配成参考文献中的浓度,进样;
: m& }+ S- J, `要求:分离度达1.5以上,分析时间通常为主身份保留时间的2-3倍,分析时间长可考虑采用梯度洗脱,共 n+3张图谱  }1 o- ^  f6 B% ]3 ~" y" O
系统适用性试验:配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析,该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%,保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外,杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,理论塔板数应符合质量标准的规定。(已知杂质)8 E& F3 C0 X( q
耐用性:分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时,仪器色谱行为的变化,每个条件下各测试两次。可接受的标准为:各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离;各条件下的杂质含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内。: c6 g5 j' }  r* z! T
2、空白溶剂以及辅料干扰试验:取溶解样品用的溶剂,注入液相色谱仪,记录色谱图。观察溶剂图谱情况。并取样品、处方量的空白辅料按同样方法配成一定的浓度,进样,记录的谱图。看辅料是否有干
$ v; K- w9 M: D扰。共三张图谱,辅料吸收峰面积相对于主峰<0.05%视为无干扰。 杂质定位:如有已知杂质并且杂质对照品可获得的,配制杂质对照溶液,进样,记录色谱图。共四张图谱。
3 S0 H- _% _, V5 S# C3、专属性:正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。8 y) X/ L( Z" v& E7 b, C
4、检测限与定量限:检测限用稀释法—12个样12针。配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%,峰面积的相对标准差应不大于5.0%。检测限S/N>3,定量限S/N>10。
3 R2 `5 }3 [# Z0 l: C  x5、回收率(已知杂质):分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在80%~120%之间,RSD<2.0%。各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间,如杂质的浓度为定量限,则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。
; C4 a+ t* ?5 T6、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r>0.999。截距在100%响应值的25%以内,响应因子的相对标准差应不大于10%。3 _+ a* Y' L: E; I* d5 t( R' D3 g
7、1%精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。
7 x8 N' F% B# P8、重复性试验(已知杂质):双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<15.0%。
" @; n5 s8 c7 m& ]9 u9、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液,平行测定两次主成分与杂质的含量,然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4℃)中,在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为:主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内,并不得出现新的大于报告限度的杂质。, c" X* m" S' R/ t, s5 {
10、小试方法验证及被仿制品:被仿制品1%自身对照,被仿制品100%样品,小试100%,小试1%自身对照。方法验证:中试样品三批,100%样品和1%自身对照,空白溶剂。
  a8 Y+ V9 P1 ^3 E. K: a11、注明:主峰图谱要求——拖尾因子0.95≤r≤1.05,分离度最好要求1.5,理论板数一般不低于3000.(个别品种需根据实际要求而定)。
0 n  _# B' F5 {: y1 {三、聚合物方法学研究图谱
0 i' z9 G0 Y. t* w6 V1系统适应性试验(水和磷酸盐缓冲液):蓝色葡聚糖2000和对照品,理论塔板数要求不低于700。, o) [3 D% ~; X6 A) i$ k
2、空白辅料9 l' X- t7 ]8 v2 ]% F  j" p
3、供试品
& T" K9 o+ a( H+ s# k- F; \8 J4、专属性试验:供试品,辅料干扰。. ?& t- @; t& [* F' H
5、检测限与定量限:般以信噪比3:1相应浓度确定最低检测限,以检测限×1000的量或浓度作为测定量(浓度)
; o: R% L: B' _" U4 [4 @1 G6、1%进样精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。) m% c1 H: y. r3 t
7、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。& ~2 i! A4 \* u0 r6 \# n
8、线性:(浓度范围20%-200%)7个样。
, a6 {$ r5 T2 a) v" J! m供试品溶液的浓度与聚合物测定结果的相关性考察:制备系列的供试品溶液,浓度范围为规定浓度的50%~200%,共三份样品,以测得的高聚物峰面积对溶液浓度进行线性回归,相关系数r应大于0.99。 F值测定的重现性考察:F值为对照溶液的浓度(mg)与测得的峰面积的比值,要求日内、日间的相对标准偏差在5%以内。
' c8 s8 e4 Q$ F9 X; |# e对照品* J  z2 T; m9 J
20%
; Y8 }$ g( Y  v50%/ \! C4 a3 _: g5 m" P
80%7 o# n* Z7 K; X) R8 B+ H4 }1 T
100%7 k' l0 Q( l* k3 ^2 F, q6 w+ e) ]
120%! c- c$ }- N  H$ T# ?
150%  F) o; q7 a) h$ D
200%9 L/ i$ h8 N1 d! {; m
9、聚合物测定(方法验证)4 K& K+ N7 ]! i; m- n
四、影响因素五天和十天:分别作含量测定和有关物质
) Q6 S% \- ]. D, ?含量测定双样双针,一样两针,高温,高湿,强光、对照品。 有关物质单样单针,100%样品、1%自身对照,空白溶剂。
! h; p& x, {9 o1 S- g. Z: O, ~1 e9 z3 |! X
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沙发
hexiao 发表于 2017-3-29 12:39:29 | 只看该作者
好贴,支持一下
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6#
hongshan 发表于 2017-3-30 08:15:01 | 只看该作者
对照双样双针是否符合目前的要求,做含量药检所要求,至少三加二,比较通行的办法是五加二,您这个有出处吗?或者是基于什么考虑。望解答~~
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7#
xiaodong125 发表于 2017-3-31 11:37:45 | 只看该作者
谢谢分享,学习学习
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8#
xiaoxiao 发表于 2017-3-31 21:30:38 | 只看该作者
五、液相进样针和液相进样器的区别, ]7 [4 h( L. {. F' c& ^
众所周知,液相自动进样器的进样针头,因为多次刺入样品杯的橡胶上盖,故特别容易被橡胶碎屑堵塞住针孔,造成进样不畅或根本不能进样。液相手动进样需要进样针,是一个微量注射器,一般10-100微升不等,针头是平的,这与气相进样针有区别。液相进样器有两种:手动与自动,手动进样需要进样针,它是一个六通阀及一个定量环组成。自动进样设置比较复杂,也是有六通环的,它进样不需要人工。进样也很精确(进样量及保留时间)。
) G% d: S0 Q5 ^1 ]+ B0 ~六、液相进样针的使用方法
+ w- Q$ J! q! w/ Y' S: `4 e( |(1) 在使用前必须检查有无针尖毛刺针卷曲以及简身裂缝。
$ q7 n6 \& O$ c* j6 u0 h: p(2) 为了消除样品之间的前一个样品的残留,需要使用样品进行5~20次的清洗。但是最初的2~3次的样品必须作废弃处理。  U- x# I$ G! r& l
(3) 为了从针筒内去除气泡、将针尖浸入在样品溶液内重复进行抽取推出的操作.(将针向上侧容易去除气泡。)
5 l$ F% X% c7 R6 ^(4) 抽取比最终所需量多的样品,然后再再与刻度线进行对准。注意注射器不要倾斜。先用不会产生细小纤维的纸类等擦拭针尖后再注射。6 W0 Z+ s; S9 P- R' S& |% V
(5) 使用后必须用纯水或丙酮进行清洗,在进行空气干燥后做保管。
2 x; B( J3 h- w$ `
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9#
xterra2012 发表于 2017-4-18 08:41:48 | 只看该作者
药典就有   USPEPJP
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10#
joysun611 发表于 2021-8-27 16:53:48 | 只看该作者
谢谢分享,楼主辛苦啦
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