Agilent 1260 HPLC 操作规程 N% q4 X$ W, q; s; J5 y
8 V8 k- d& j j
1 开机
% Z/ S @2 I, |, n1.1 打开电脑
* m8 Y+ s2 H% c9 c3 C1.2 打开液相色谱各个模块的电源
1 m+ R! l% j4 Y1.3 双击桌面“LC1260(Online)”,进入联机界面
' Z% x7 v0 p, b7 c! R# m1.4 排气:2 `2 ~; p- U+ O8 G: J. c
1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)
# z2 k6 p" W6 B5 @9 f1.4.2 右键单击“Pump”图标区域,选择“Method”选项,进入泵编辑画面,设
. G5 P& n9 D# b( R4 r' I流速:5ml/min,点击“确定”;
$ D; a) u/ e; X/ `$ t& v1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域,点击“Control”选项,选中“ON”,点击“确
# v. d9 d) c; F! r7 c8 u% j) I# F定”,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止(一般为5分钟),切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止;. s. l, a8 C6 t
1.4.4 右键单击“Pump” 图标,点击“Method”选项,设流速:0ml/min,手动
7 g* m, M7 `6 W5 z* I4 s旋紧冲洗阀;
( k/ O9 z; V2 q' V. |) l2 i6 t: i2 o1.4.5 右键单击“Pump”图标,点击“Method”选项,按照方法要求选择合适比例! R7 p5 B6 Y! a3 L
的流动相,设流速:1.0ml/min;(不一定是1)
: d. c& [# j: J: y& N9 ?; j- ~1 B1.4.6 同理右键单击“Column Comp”,“DAD”图标,点击“Method”选项,按照
& i& O: D3 K( @ g- M) }4 Q; b方法的要求设置温度,波长,点击“控制” 选项,“ON”打开柱温箱和检测器。
j/ p& I' ~1 N2 编辑方法# i6 G0 f p9 C: f: i8 o
2.1 点击“Method”—— “Edit EntireMethod”开始编辑完整方法;
8 L! g+ N6 ?& P. J2 }# E2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项,进入下一选项卡,选择“Als”(自动进样),点击“OK”,进入下一选项;; x- n3 Z% u; i, {5 d
2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项,在“Method Comments”中加入方法的信息(如:This is for test!),选择“OK”,进入下一选项;3 E0 ~: R) C, ?, ^9 T
2.4 泵参数设定:右键单击“Pump”图标,点击“Method…”选项,设置“Flow”:如1.0ml/min;“Stop Time”:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间),按照要求选择合适比例的流动相配比,选择“OK”,进入下一选项;
0 \6 i0 `" Y$ ^2.5 自动进样器参数设定:右键单击“Sampler”图标,点击“Method”选项,选; c* P5 K4 O0 O& o
择“Injection volume”,输入进样体积,选择“OK”,进入下一选项;
4 F, d i4 {$ ~5 m; b% B9 H6 U2.6 柱温箱参数设定:右键单击“Column Comp”,点击“Method”选项,设置“Left”温度(可设置温度范围:低于室温10℃-80℃),一般“Left”和“Right”温度一致,选择“Combined”绑定即可,“Stop Time”选择“As Pump /Injector”,选择“OK”,进入下一选项;3 z, T/ U& k' O
2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ,点击“Method…”选项,下方的空白处输入所需的检测波长(可根据需要选择多个波长,最多可选8个波长);“Stop Time”选择“As Pump /Injector”;“Spectrum” ——“Store”选项下,根据需要选择 “None”或“All(全波长扫描)”等选项,选择“OK”,进入下一选项;& d! B# o3 M' ], t% R
2.8 编辑方法完毕,从“Method”菜单中,选中“Save Method As”,输入一方法
7 s7 e+ y6 R6 s, V) I" P名,选择“OK”,保存方法成功。
0 f4 r7 I) r% }3 G1 V2 @3 单针进样 [! x- J7 Z% Z/ k$ ^% g2 O( _
3.1 从“Run Control”菜单中,选择“Sample Information”选项,输入“Operator Name”;在“Data File”中选择“Path”和 “Prefix/Counter(文件命名)”设置“Prefix(一般设置为年月日)”和“Counter”;输入“Location(样品位置)”和“Sample Name”,选择“OK”,进入下一选项;8 M1 ]3 z3 ^4 e) l) q4 G0 S
3.2 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Method”选项,开始进样。
* v) L( o3 F: I0 e1 t; d: i4 序列进样
& M# x! v/ n) j) P4.1 选择“Sequence”菜单下“ Sequence Table”选项,在“Confiqure Table”中选择需要选项,一般为“Vial(样品瓶)”,“Sample Name(样品名称)”,“Method Name(方法名称)”,“Inj/Vial(进样次数)”,“Sample Type(样品类型)”,“Datafile(文件名)”和“Inj Volume(进样体积)”;
' N, A: | w8 i) i4.2 点击“Inset”生成一行,设置上述参数,选中该行,点击“Copy”和“Paste”复制后修改相应参数,即生成序列表,选择“OK”,进入下一选项;- j+ s1 K3 a, L2 o! }& A
4.3 点击“Sequence”菜单下“ Sequence Parameters”选项,选择序列数据的“Path”(序列会自动生成以“序列名称-时间”为名称的文件夹保存数据),数据建议选择 “Prefix/Counter”保存;在“Shutdown”选项下选中“Post-Sequence Command/Macro”,根据需要选择“PUMPALL OFF(序列结束后关闭泵)”” “LAMPALL OFF(序列结束后关闭紫外灯)”” “STANDBY(序列结束后关闭紫外灯和泵)”,选择“OK”,进入下一选项;
8 [$ W. ]/ _* j- ~' m(注:若“Path”中默认保存于C盘,则可点击“View”,选择“Preferences”,根据需要添加相应的“SequenceTemplates”“Data”“Master Methods”保存路径)7 I: \0 y7 F% A5 _* L) n2 ~
4.4 从“Sequence”菜单,选中“Save Sequence Template As”,输入一序列名,选择“OK”,即可;
. o* [; L$ g d' x4.5 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Sequence”选项,开始序列进样。: C9 |! `! D A1 J
(注:若中途停止运行,则选择“Run Control”中的“Stop Run/Inject/ Sequence”可保留图谱信息,若选择Abort,则所有图谱信息都丢失)/ @; s1 ^! h6 r; A
5 数据分析(脱机状态使用)
8 P D% I0 d: Q5 p \; w& G$ i% ? m5.1 双击“LC1260(Offline)”图标进入的脱机画面6 h# m/ ]7 _# ?9 Q
5.2 从“View”菜单中,点击“Data Analysis”进入数据分析画面
, z/ y; q# j$ |3 p# T5.3 从“File”菜单选择“Load Signal”,选中所需的数据文件名,点击“OK”,则数据被调出。( {) Y8 ^& [. f5 O9 a
5.4 谱图优化:从“Graphics”菜单中选择“Signal Options”。从“范围” 中选择“Full”或“Use Ranges” 选择所需“Time Range”和“Response Range”,选择“OK”;从“Integration”中选择“Integration Events”,调整“Area Reject”和“Height Reject”删除杂峰;点击“Set Integration”图标,可选择性消除不需要的积分,若想消除该操作,则选择“Method Manual Events”上排左起第5个图标进行移除操作即可,点击左边“√”图标,将积分参数存入方法并退出“Integration Events”。
/ Y% }+ y, ^- d" p1 D @; @" O& L(注:“Set Integration”图标为)
9 }2 T% K0 {: E& |8 t2 S6 标准曲线绘制
5 N" l+ o1 R' c& H" S; X# r: L6.1 选择“Calibration”菜单下“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup”中“Level(即标曲中对应的点,第一个点即为1)”和“Defanlt Amount(标准品对应点的浓度)”,选择“OK”;9 R9 i6 r& }+ d& A/ H5 ~3 y5 k# v
6.2 通过选择“Calibration”菜单下的“Add Level”选项依次添加各点参数,若为外标法,在“ISTD”项下选“NO”,若为内标法则选“Yes”;“#”项下对应标准品和内标无的数字的应统一;若想更改标准曲线中的对应点;( _" @7 {3 x6 R4 F1 V- P) O: g
6.3 选择“Calibration”菜单下的“Recalibrate”项的“Mode”选项,选择“Average”则表示取当前点与标曲中对应点的平均值替代标曲中原对应点,若选择“Replace”则表示将当前点取代标曲中对应点;
. i6 }# Q% x) Q% [. c% G(注:修改“Defanlt Amount”中浓度单位的方法:选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Amount Units”,设置浓度单位;选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Default CalibrationCurve”,选择合适的曲线类型-Type,是否过原点-Origin和各点对于标准曲线的比重-Weight,通常选Equal)
9 {" Z' X- M) s+ }8 z6.4 调出样品谱图,点击需要计算浓度的色谱峰,选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Detail”,点击“OK”后选择“打印预览”图标,在报告中即可体现计算结果。; M" Y& T) j8 T( a. i
7 图谱重叠设置5 Q$ R" T5 V- `9 K( c; k4 m- J( X
7.1 选择“File”菜单下“Overlay Signal”选项,选择任意需要重叠的图谱;1 Q/ ?: N0 J+ T$ J- j7 `! n8 {
7.2 在“Signal”选项下,选择“3D Signal Overlay”图标(紧邻图谱上方左起第四个图标),在弹出的“Adjust Signal OverlayOptions”对话框中调节交错时间和高度;若想移除重叠谱图,点击第六个图标。
: I* I0 I" q2 O8 信噪比等参数计算0 D1 ^1 B: m" I/ k; w
8.1 选择“Report”菜单中的“System Suitability”项下的“Edit Noise Range”选项,设置时间范围(超过1min);, H4 C6 o% q( L
8.2 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Perfomance+Noise”,点击“OK”后,即可预览信噪比参数;
5 G3 x; r: ?% @) H, {2 w. [8.3 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Extended Perfomance”,点击“OK”后,即可预览对称性、拖尾因子等所有参数。! B3 t; h5 }( { n$ u6 N
9 程序运行时检测出峰情况! C- ]: H8 v" C9 d: {" D9 p
选择“File”菜单下的“Snapshot”选项即可。# ~" U: g* p! C# m
10 打印报告- I5 ?( h. h" ]# Q1 j" B4 F
10.1 从“Report”菜单中选择“Report Mode”,选择“Use Classic Reporting”;
& f& @% P+ U4 p. U9 \10.2 从“Report”菜单中选择“打印报告”,则报告结果将被打印。
- r* f) u8 U4 l1 b11 关机
/ u9 P G3 v! B2 S1 n3 [11.1 冲洗色谱柱和系统后,退出化学工作站及其它窗口,关闭计算机;0 z- C1 K1 H& e; c( _/ d
11.2关闭Agilent 1260各模块电源开关。2 ^* R' U/ o' c, A$ Z
4 {: X2 W8 I) g7 b" z仪器使用注意事项* f M! [) n: Y5 q C
1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行。勿使用多日存放的蒸馏水。
! a; `. w9 b- n$ s5 R- s2. 在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,下面阀A/D接水相/盐溶液,C/B接有机溶剂。使用盐时脱气机易堵,可将管路入口与出口反接,用60摄氏度的温水反冲,用针筒缓慢吸200mL左右。6 G. M, Z: [! s% C/ s
3. 流动相瓶中的滤头脏。压力波动,可将滤头拔下,检查是否与滤头有关。滤头污染,可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或过夜,看污染程度,最后用水冲洗干净,重新装好。3 H: z8 q# [1 f
4. seal-wash 用10%的异丙醇。使用缓冲盐时要加seal-wash选项,周期清洗。
8 @* g7 F& y: ]) b5. LAN与CAN不能串联,LAN接仪器,PC。CAN为模块间通讯。# j B) ^ [% i) U1 _7 P! G( s
6. 柱温箱选择3uL,减少死体积,延迟体积。# `' i+ |5 f! B, e6 B' x. J v7 W
7. 液相上各种灯颜色。电源打开后,四个模块左侧灯亮绿色。状态指示灯位于各自模块的右上方:呈黄色:该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检。呈绿色:该仪器正在运行,采集数据(Run)。无颜色:该仪器已准备好等待运行(Pre-run)。呈红色:该仪器检测到有故障发生,仪器在错误状态,红色多发生于漏液时。
& w. t; H1 S/ `1 a( }/ n6 \8. 过滤白头位于排气阀内,当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的。
! n* S2 C" [6 V- T3 l3 `, ^$ @9. 毛细管线分类:0.17mm内径 ------绿色 ;0.12mm内径-------红;0.25mm内径-------蓝PEEK 管线:内径 -----0.18mm。3 B* F0 r# _ P9 ~2 V. P
10. 灯能量测试,先将灯预热,用水平衡系统。启动Agilent Lab advisor 进行测试。启动软件 connect(界面右上部分) Service&Diagnostics(左侧导航栏) 选择G4212B Intensity Test Run 查看结果。* v: A [% d7 h" g1 G
11. 柱子存放:柱子填充乙腈或甲醇,两端堵头封存,每一个月重新使用乙腈或甲醇,填充封存。 |