Agilent 1260 HPLC 操作规程
8 J! e% p, {- H1 b+ e 6 o- p0 X* b- R7 P2 d% x
1 开机
3 N9 i" t ]! ^$ \2 k a1.1 打开电脑
8 W. E# P6 r. T% Z( Y' F1.2 打开液相色谱各个模块的电源
' b1 p2 Y2 I. a5 i8 K. z1.3 双击桌面“LC1260(Online)”,进入联机界面# ?# D9 c7 I9 H V. _2 s6 {( W
1.4 排气:5 N, m% ]* K$ L% H' h0 l. d
1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)8 Y& ~$ j: R8 f1 z2 l/ X
1.4.2 右键单击“Pump”图标区域,选择“Method”选项,进入泵编辑画面,设( Y) X' }+ ~3 u: |: x
流速:5ml/min,点击“确定”;) K0 A, L( S/ R
1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域,点击“Control”选项,选中“ON”,点击“确
: E- ~) ] a! B6 T) ~8 v定”,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止(一般为5分钟),切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止;7 ?1 i7 ~! I2 a! r
1.4.4 右键单击“Pump” 图标,点击“Method”选项,设流速:0ml/min,手动% n4 f( F. Y8 e$ y0 B3 k
旋紧冲洗阀;
- s# q) Q9 R$ Z: Y9 g& q1.4.5 右键单击“Pump”图标,点击“Method”选项,按照方法要求选择合适比例
* }7 P3 L+ I+ p t( P$ V- ^+ [的流动相,设流速:1.0ml/min;(不一定是1)) d0 x* `" U% Y6 w& Y( o
1.4.6 同理右键单击“Column Comp”,“DAD”图标,点击“Method”选项,按照
; k) }7 Y/ M: E& m& D! ]% ?$ h2 `& d方法的要求设置温度,波长,点击“控制” 选项,“ON”打开柱温箱和检测器。
: [4 K, y. l( F& c k+ o5 r( V2 编辑方法4 v; b k& g9 ?
2.1 点击“Method”—— “Edit EntireMethod”开始编辑完整方法;
% B( K! l2 U% A2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项,进入下一选项卡,选择“Als”(自动进样),点击“OK”,进入下一选项;
^7 o- k9 C( G5 H v D2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项,在“Method Comments”中加入方法的信息(如:This is for test!),选择“OK”,进入下一选项;3 L8 J6 U+ t& K+ ?- e: F. S J
2.4 泵参数设定:右键单击“Pump”图标,点击“Method…”选项,设置“Flow”:如1.0ml/min;“Stop Time”:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间),按照要求选择合适比例的流动相配比,选择“OK”,进入下一选项;
7 ^" V9 e( }1 B9 w' I; S2.5 自动进样器参数设定:右键单击“Sampler”图标,点击“Method”选项,选 Y) E' x5 n3 A9 g- Z: B
择“Injection volume”,输入进样体积,选择“OK”,进入下一选项;
( m2 p2 y5 K7 s2.6 柱温箱参数设定:右键单击“Column Comp”,点击“Method”选项,设置“Left”温度(可设置温度范围:低于室温10℃-80℃),一般“Left”和“Right”温度一致,选择“Combined”绑定即可,“Stop Time”选择“As Pump /Injector”,选择“OK”,进入下一选项;/ [+ H3 z. |% R' ?. L: m
2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ,点击“Method…”选项,下方的空白处输入所需的检测波长(可根据需要选择多个波长,最多可选8个波长);“Stop Time”选择“As Pump /Injector”;“Spectrum” ——“Store”选项下,根据需要选择 “None”或“All(全波长扫描)”等选项,选择“OK”,进入下一选项;
8 `) ?& g' a2 y. a/ H2.8 编辑方法完毕,从“Method”菜单中,选中“Save Method As”,输入一方法
' k; [3 O6 m* P+ c ?名,选择“OK”,保存方法成功。
; a3 G7 L4 {9 K5 D3 单针进样
# B6 A4 ]- @: w8 M# o3 X% Z3.1 从“Run Control”菜单中,选择“Sample Information”选项,输入“Operator Name”;在“Data File”中选择“Path”和 “Prefix/Counter(文件命名)”设置“Prefix(一般设置为年月日)”和“Counter”;输入“Location(样品位置)”和“Sample Name”,选择“OK”,进入下一选项;6 ~1 t/ z3 B& ^# f
3.2 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Method”选项,开始进样。8 x* v- s0 c% {3 P4 e# w: H4 p
4 序列进样
, g6 G8 F8 d: @4 x: s6 S, \3 j4.1 选择“Sequence”菜单下“ Sequence Table”选项,在“Confiqure Table”中选择需要选项,一般为“Vial(样品瓶)”,“Sample Name(样品名称)”,“Method Name(方法名称)”,“Inj/Vial(进样次数)”,“Sample Type(样品类型)”,“Datafile(文件名)”和“Inj Volume(进样体积)”;
/ X" O4 U$ R- [4.2 点击“Inset”生成一行,设置上述参数,选中该行,点击“Copy”和“Paste”复制后修改相应参数,即生成序列表,选择“OK”,进入下一选项;; H9 i4 I) k( j" T
4.3 点击“Sequence”菜单下“ Sequence Parameters”选项,选择序列数据的“Path”(序列会自动生成以“序列名称-时间”为名称的文件夹保存数据),数据建议选择 “Prefix/Counter”保存;在“Shutdown”选项下选中“Post-Sequence Command/Macro”,根据需要选择“PUMPALL OFF(序列结束后关闭泵)”” “LAMPALL OFF(序列结束后关闭紫外灯)”” “STANDBY(序列结束后关闭紫外灯和泵)”,选择“OK”,进入下一选项;
, j/ o4 B6 b4 K% o' P0 P8 M(注:若“Path”中默认保存于C盘,则可点击“View”,选择“Preferences”,根据需要添加相应的“SequenceTemplates”“Data”“Master Methods”保存路径)4 D+ Y) ?2 H7 ^6 e8 W+ T
4.4 从“Sequence”菜单,选中“Save Sequence Template As”,输入一序列名,选择“OK”,即可;
3 o4 b- j4 v/ a1 }4.5 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Sequence”选项,开始序列进样。! I. b& g9 c6 n4 {+ @
(注:若中途停止运行,则选择“Run Control”中的“Stop Run/Inject/ Sequence”可保留图谱信息,若选择Abort,则所有图谱信息都丢失)% U5 J0 H+ l% H$ t# K" e
5 数据分析(脱机状态使用)
- ?7 t% k7 s7 s& ?: `; T- i5.1 双击“LC1260(Offline)”图标进入的脱机画面
" W3 V# U; y' _8 `; m I3 a# @' `3 M* a' o5.2 从“View”菜单中,点击“Data Analysis”进入数据分析画面1 z v- B% A |8 ?5 T$ n/ x5 g
5.3 从“File”菜单选择“Load Signal”,选中所需的数据文件名,点击“OK”,则数据被调出。. X- o+ z f. c/ e: ?0 W
5.4 谱图优化:从“Graphics”菜单中选择“Signal Options”。从“范围” 中选择“Full”或“Use Ranges” 选择所需“Time Range”和“Response Range”,选择“OK”;从“Integration”中选择“Integration Events”,调整“Area Reject”和“Height Reject”删除杂峰;点击“Set Integration”图标,可选择性消除不需要的积分,若想消除该操作,则选择“Method Manual Events”上排左起第5个图标进行移除操作即可,点击左边“√”图标,将积分参数存入方法并退出“Integration Events”。
, ~) x# b I0 }, x2 x& a(注:“Set Integration”图标为)! r/ s( L$ r" {0 J, |2 s6 t
6 标准曲线绘制
9 Q7 M( P E6 f' Y% k9 u8 g- _6.1 选择“Calibration”菜单下“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup”中“Level(即标曲中对应的点,第一个点即为1)”和“Defanlt Amount(标准品对应点的浓度)”,选择“OK”;5 h( m9 V+ b- Z$ B4 e) i# }" f$ c
6.2 通过选择“Calibration”菜单下的“Add Level”选项依次添加各点参数,若为外标法,在“ISTD”项下选“NO”,若为内标法则选“Yes”;“#”项下对应标准品和内标无的数字的应统一;若想更改标准曲线中的对应点;& n4 H5 R" Q! n" I& S* T4 }
6.3 选择“Calibration”菜单下的“Recalibrate”项的“Mode”选项,选择“Average”则表示取当前点与标曲中对应点的平均值替代标曲中原对应点,若选择“Replace”则表示将当前点取代标曲中对应点;" o$ P) _$ K2 ~: A" k# \5 J
(注:修改“Defanlt Amount”中浓度单位的方法:选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Amount Units”,设置浓度单位;选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Default CalibrationCurve”,选择合适的曲线类型-Type,是否过原点-Origin和各点对于标准曲线的比重-Weight,通常选Equal)& i5 F3 A# v; e% P) w
6.4 调出样品谱图,点击需要计算浓度的色谱峰,选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Detail”,点击“OK”后选择“打印预览”图标,在报告中即可体现计算结果。
$ I0 i, Y5 Q8 i3 Q& L, S! D8 C( n8 {7 图谱重叠设置! F' S. O, B, c. ?" O7 i
7.1 选择“File”菜单下“Overlay Signal”选项,选择任意需要重叠的图谱;
: o3 Y( h: S& Q5 R7.2 在“Signal”选项下,选择“3D Signal Overlay”图标(紧邻图谱上方左起第四个图标),在弹出的“Adjust Signal OverlayOptions”对话框中调节交错时间和高度;若想移除重叠谱图,点击第六个图标。
# [. N8 B# q/ `4 d4 q0 [( P8 信噪比等参数计算
. T; H* ]5 F, W8 j/ d* q8.1 选择“Report”菜单中的“System Suitability”项下的“Edit Noise Range”选项,设置时间范围(超过1min);
% D* F* y9 w- R8 t' d8.2 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Perfomance+Noise”,点击“OK”后,即可预览信噪比参数;
0 @: B2 o% y; G2 p/ c5 K$ ~- S8.3 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Extended Perfomance”,点击“OK”后,即可预览对称性、拖尾因子等所有参数。
6 x( s! F2 [. k" c0 Z: A( d9 程序运行时检测出峰情况
8 w8 x3 v" Q8 s选择“File”菜单下的“Snapshot”选项即可。
( k! E, {1 _! b* \8 t8 O10 打印报告4 K# a& ?$ S3 r3 O' R: w
10.1 从“Report”菜单中选择“Report Mode”,选择“Use Classic Reporting”;
- P$ T& Q; V+ z9 q. S3 A10.2 从“Report”菜单中选择“打印报告”,则报告结果将被打印。8 [4 }) {8 q3 V0 W
11 关机
$ w5 S y9 r$ H% P5 Y( y. N1 y3 b1 t11.1 冲洗色谱柱和系统后,退出化学工作站及其它窗口,关闭计算机;
2 E+ l- R' ]: [ Z& @6 [" o11.2关闭Agilent 1260各模块电源开关。+ J' T, h& y; G* B' S
" J+ W' L3 v& E仪器使用注意事项
% k5 I( M9 Z [ v4 t) k$ J3 X1. 用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行。勿使用多日存放的蒸馏水。
7 u" {) v6 s4 j t1 Q9 l* B2. 在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,下面阀A/D接水相/盐溶液,C/B接有机溶剂。使用盐时脱气机易堵,可将管路入口与出口反接,用60摄氏度的温水反冲,用针筒缓慢吸200mL左右。
7 f8 M4 F" f! U4 Q; }$ F9 S3. 流动相瓶中的滤头脏。压力波动,可将滤头拔下,检查是否与滤头有关。滤头污染,可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或过夜,看污染程度,最后用水冲洗干净,重新装好。
' a! P! p9 H, M0 q. v# [4. seal-wash 用10%的异丙醇。使用缓冲盐时要加seal-wash选项,周期清洗。4 q {: s- M# F* o5 K9 t Z' S0 h
5. LAN与CAN不能串联,LAN接仪器,PC。CAN为模块间通讯。( N( s# B8 x$ }0 d' E1 Q' a
6. 柱温箱选择3uL,减少死体积,延迟体积。
& s! g0 L6 d8 Z5 T) m% c- l- l7. 液相上各种灯颜色。电源打开后,四个模块左侧灯亮绿色。状态指示灯位于各自模块的右上方:呈黄色:该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检。呈绿色:该仪器正在运行,采集数据(Run)。无颜色:该仪器已准备好等待运行(Pre-run)。呈红色:该仪器检测到有故障发生,仪器在错误状态,红色多发生于漏液时。
0 n! o1 N' A, M: I) Y8. 过滤白头位于排气阀内,当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的。
; G" U, o$ e: p8 q; b9. 毛细管线分类:0.17mm内径 ------绿色 ;0.12mm内径-------红;0.25mm内径-------蓝PEEK 管线:内径 -----0.18mm。5 K# v# x9 s0 x5 H! p7 g& X1 f
10. 灯能量测试,先将灯预热,用水平衡系统。启动Agilent Lab advisor 进行测试。启动软件 connect(界面右上部分) Service&Diagnostics(左侧导航栏) 选择G4212B Intensity Test Run 查看结果。
" z: y1 i+ W! e1 P, X11. 柱子存放:柱子填充乙腈或甲醇,两端堵头封存,每一个月重新使用乙腈或甲醇,填充封存。 |