【夯实基础】液相色谱定量分析原理

【夯实基础】液相色谱定量分析原理
2015-05-21 仪器信息网
液相色谱定量分析原理
在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:

• 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
  
  

• 由已知量的标样可求得定量校正因子
  
  

• 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
  
  

• 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
  
  

液相色谱定量分析的步骤

1、选择一个适合定量分析的色谱方法：

• 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
• 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
  . C& ^1 e2 y2 J1 D& I8 ~, X% B- o
  
  % }" S' }$ t7 o1 `6 `1 L

• 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围
  
  
  

2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
3、考查定量方法的准确度及精密度
# Y+ V+ b; Z5 S* N$ v# X6 [4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
鉴别需定量的色谱峰(定性)
: P4 ~1 |8 B& O6 i, o* U定性鉴别每个要定量的色谱峰
& A- j: x# A6 I2 E* {# |3 Z1 c# q首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt)，通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份，色谱定性是用与标样比较保留时间的方法，判据并不充分进一步的确认(定性)1、标准加入法
2、同时用其它方法：其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 （PDA：光谱图比较、谱库检索；MS：质谱图解析、谱库检索）3、其它仪器方法
确认定量峰的一致性
确认色谱峰的一致性(纯度)
6 c* z( i5 S7 j! L8 [( y
: c  G) y/ q+ w

• 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
  
  
  4 z5 [3 W" {0 A% d9 Y8 M4 ^

• 检查是否有共流出的物质（杂质）干扰
  
  
  

色谱峰一致性(纯度)确认的方法

• 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
  ) y" S+ B/ M2 S  a, H/ ?9 K% i! \; d
  
  

• 峰纯度鉴定
  7 a' }. `, l9 S* {0 l
  
  / M3 ~  c6 g' G. i8 w

• 2996的纯度角理论
  
  * Q2 }! |# e0 n0 Y+ H3 K* Z4 x+ x

常用的定量方法
标准曲线法,分为外标法和内标法:

外标法：在液相色谱中用得最多

内标法：准确，但是麻烦，在标准方法中用得最多

影响定量分析结果的因素

准确度不好可能由下述原因造成:

–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确

精密度不好可能的原因:

峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降

文章来源：百度文库

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