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[仪器分析] 【夯实基础】液相色谱定量分析原理

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楼主
xiaoxiao 发表于 2015-5-22 06:55:22 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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本帖最后由 xiaoxiao 于 2015-5-22 06:57 AM 编辑
4 Y# y7 f. u, ^) r/ @1 h$ c4 l【夯实基础】液相色谱定量分析原理
. l/ Q/ |3 c! j9 S3 R2015-05-21 仪器信息网
% l  r2 Y& Z. D4 B液相色谱定量分析原理
" W8 J) b3 z  E/ ^% Q在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:
& ^; {6 ]$ M  U3 l
  • 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比

    * I( K1 L, U6 G+ @) T1 P
  • 由已知量的标样可求得定量校正因子
    0 V8 }4 p& `/ C
  • 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量

      T. D8 R* K. O( w
  • 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量

    # f! A) L8 L/ [$ H
液相色谱定量分析的步骤
1、选择一个适合定量分析的色谱方法:
  • 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
  • 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
    $ x! s$ R  e/ {8 p' {5 B

    6 E5 i2 \: d* S! Z6 E4 D
  • 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围. f! Z  \" J+ F& u
    ' A* g2 A  c$ h+ H
2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
; M, v+ r0 U" o6 `1 L8 o# b
3、考查定量方法的准确度及精密度* c& E3 g, }2 P1 b! a
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果3 ^) n* T: [% P
鉴别需定量的色谱峰(定性)
& V: n6 m8 p' m0 K9 N5 _8 M9 m$ i- U2 A
定性鉴别每个要定量的色谱峰/ C4 ?4 b( M& z; Y" ?1 ]% s0 u, d
首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt),通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份,色谱定性是用与标样比较保留时间的方法,判据并不充分进一步的确认(定性)
1、标准加入法
% _( x1 T8 P2 ~) O, U, R8 x
2、同时用其它方法:其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 (PDA:光谱图比较、谱库检索;MS:质谱图解析、谱库检索)3、其它仪器方法  J. M6 ?" m5 C- G- j
确认定量峰的一致性

7 d8 a5 t2 @: X, {确认色谱峰的一致性(纯度). K& e1 T/ x/ l9 }
5 b& E. N7 B: w  H' U
  • 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
    * d9 u: F9 I5 J* A: x* f  O
    5 {, ]* r& i' _/ o# O+ `
  • 检查是否有共流出的物质(杂质)干扰
    4 Z; h- a2 Z4 j( L3 v' w2 C

    7 z8 N$ o3 r( u& S
色谱峰一致性(纯度)确认的方法- o& b4 q2 D1 S* k2 H/ S
  • 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
    ! d7 c. K: y  g+ q7 l0 w

    ; U3 t0 M6 N: ~. X7 e8 X+ n: I0 ?4 o
  • 峰纯度鉴定8 g% ?  K( _+ ^; y# U5 T/ L
    : n  ^1 P9 V6 e1 H7 W
  • 2996的纯度角理论
    5 \% b! M. o# b
常用的定量方法
) I- d1 F  C" v+ A* ]/ j标准曲线法,分为外标法和内标法:
6 p4 r* y9 c* ^4 B0 l

) a/ F0 W; f4 D$ C& W% @
外标法:在液相色谱中用得最多
内标法:准确,但是麻烦,在标准方法中用得最多
影响定量分析结果的因素
准确度不好可能由下述原因造成:
–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确
6 @/ T  P" X- t5 y+ z1 _
精密度不好可能的原因:
峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降
文章来源:百度文库
7 }% @6 H$ w. [) v2 X8 o
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沙发
gongcl 发表于 2015-5-22 10:12:33 | 只看该作者
谢谢分享                 
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