【夯实基础】液相色谱定量分析原理

【夯实基础】液相色谱定量分析原理
2015-05-21 仪器信息网
) H: k# `$ r; M1 m% O; H$ C: b; q液相色谱定量分析原理
. l: P9 p# X- N" n在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:

• 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
  
  3 n( Q8 l/ ]" A

• 由已知量的标样可求得定量校正因子
  
  ' ~' I3 ?4 j5 |) Y& k

• 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
  
    V! O) A2 e$ x( N

• 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
  
  % S( L$ O" {- a. b

液相色谱定量分析的步骤

1、选择一个适合定量分析的色谱方法：

• 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
• 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
  + P/ ^! g+ Y+ J0 v( P- J3 l+ Q( E
  
  

• 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围
  2 A" U1 I0 C2 i; u- Y/ t) {# m- M
  
  

2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
3、考查定量方法的准确度及精密度
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
2 u+ @1 ?8 ]9 a9 i; H. r鉴别需定量的色谱峰(定性)
3 a& U5 ~8 |: ~" J5 ~定性鉴别每个要定量的色谱峰
7 |+ h" y, r8 M& K$ G5 L4 F% B2 ]首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt)，通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份，色谱定性是用与标样比较保留时间的方法，判据并不充分进一步的确认(定性)1、标准加入法
2、同时用其它方法：其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 （PDA：光谱图比较、谱库检索；MS：质谱图解析、谱库检索）3、其它仪器方法
; C* e6 Y6 I1 |8 P确认定量峰的一致性
确认色谱峰的一致性(纯度)

3 a1 x) k, H5 L7 M! `4 Y0 l

• 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
  
  
  : N: F; A% N+ A0 S) U; T) B: g& s

• 检查是否有共流出的物质（杂质）干扰
  % B2 k5 g+ y  U2 a# c) b7 i
  
  

色谱峰一致性(纯度)确认的方法
/ c3 i6 q2 q" K3 D& t; V

• 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
  5 L. p. ], F3 _3 z% g
  
  : U9 u. x' @3 l, t6 Z% c# y

• 峰纯度鉴定
  
  
  9 \) l$ z. n& ]2 ]( {7 U

• 2996的纯度角理论
  
  , ^& s( j' [; z- Z

常用的定量方法
* V7 z5 C* w; V  l标准曲线法,分为外标法和内标法:
) P. d& F3 p, ^: u# d
$ E  X9 N7 D3 T3 }

外标法：在液相色谱中用得最多

内标法：准确，但是麻烦，在标准方法中用得最多

影响定量分析结果的因素

准确度不好可能由下述原因造成:

–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确

4 R: k% [4 C! C5 I& A# J9 d

精密度不好可能的原因:

峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降

文章来源：百度文库

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