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[仪器分析] 【夯实基础】液相色谱定量分析原理

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楼主
xiaoxiao 发表于 2015-5-22 06:55:22 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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本帖最后由 xiaoxiao 于 2015-5-22 06:57 AM 编辑 # c( c3 ]1 G& r$ y! M9 R* R
【夯实基础】液相色谱定量分析原理
+ n2 p, t7 h, q1 K2015-05-21 仪器信息网
/ U3 y" x/ j+ T# J! A9 a" J液相色谱定量分析原理5 U! B- {* S* c! r- Z# E8 E
在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:
% R, r4 T6 W" `0 B" i; k5 v$ S' b- `
  • 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
      m* T8 e* |) e6 {7 e
  • 由已知量的标样可求得定量校正因子

    . |# k# i: i8 k4 R. Y
  • 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
    : h- A/ p( d. Y' q/ k+ ]
  • 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量
    2 g3 J6 K  ]- D/ d: q
液相色谱定量分析的步骤
1、选择一个适合定量分析的色谱方法:
  • 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
  • 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
    , e! [; h6 e4 \: ?. Y' y; o
    ( t+ J7 f8 J& M' D5 g3 ]) @
  • 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围3 Y/ N1 @5 ]" O% d
    0 X5 P4 s! c4 l9 j$ D' G
2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线) o# X( {2 n9 w3 X
3、考查定量方法的准确度及精密度
  Z* ^" |3 ~  B
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
2 H  t0 @" S) N$ d/ l5 t鉴别需定量的色谱峰(定性)
3 i5 z& L% c, o4 J. u
定性鉴别每个要定量的色谱峰% w4 E0 i# `$ `2 L+ Z( h
首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt),通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份,色谱定性是用与标样比较保留时间的方法,判据并不充分进一步的确认(定性)
1、标准加入法
6 p, {7 b: P" `6 ?, H
2、同时用其它方法:其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 (PDA:光谱图比较、谱库检索;MS:质谱图解析、谱库检索)3、其它仪器方法
5 A2 e7 n  R4 t6 v; w* u确认定量峰的一致性
2 W$ K( C, R2 [
确认色谱峰的一致性(纯度); A3 Z  j  y/ e: R3 B' @4 o

  K/ `7 n+ c2 F  H8 r4 B7 X! u2 z
  • 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份2 D/ F3 E1 e( M
    6 O. `( H/ }2 N8 X) |; P; y; P
  • 检查是否有共流出的物质(杂质)干扰
    ' p& I& ^; W8 ~( P. ~% V  p' O! V

    * Z. Z" K8 B; N* ?( u
色谱峰一致性(纯度)确认的方法+ e# \/ N" t9 z4 H) \, S5 k$ r
  • 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图. [5 r+ H- p" x
    4 s  N1 v) ]6 L7 \( N3 w( J. [0 C
  • 峰纯度鉴定2 n0 F6 G, ]: f2 N4 ^% ]" ^

    & P6 ]; a$ C  s( i# ]" n2 Q
  • 2996的纯度角理论

    ( ~% e0 \9 b/ M. Q+ i
常用的定量方法( b& y- l$ m0 ]( b
标准曲线法,分为外标法和内标法:
  e% O/ ^$ n: V9 J
* e4 ^1 A' A2 j
外标法:在液相色谱中用得最多
内标法:准确,但是麻烦,在标准方法中用得最多
影响定量分析结果的因素
准确度不好可能由下述原因造成:
–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确
$ W9 J! i/ ]. t
精密度不好可能的原因:
峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降
文章来源:百度文库
2 v5 N9 p. ?8 d3 ]) e& {. J" L
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沙发
gongcl 发表于 2015-5-22 10:12:33 | 只看该作者
谢谢分享                 
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