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[仪器分析] 【夯实基础】液相色谱定量分析原理

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楼主
xiaoxiao 发表于 2015-5-22 06:55:22 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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本帖最后由 xiaoxiao 于 2015-5-22 06:57 AM 编辑 8 R0 l$ t/ X( a+ M5 I3 }
【夯实基础】液相色谱定量分析原理$ T( n! F9 o+ p1 O6 ^1 _
2015-05-21 仪器信息网
7 ]# D- Q7 v* ^液相色谱定量分析原理( }3 ~! e* g, E
在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:
# T) S3 n& z. {9 I; ]0 D1 y
  • 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
    ; }. v6 c8 p: l: x1 F
  • 由已知量的标样可求得定量校正因子

      p7 x& G, I& A6 ~/ I& ^
  • 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
    3 j2 w! S9 i9 O4 p- F
  • 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量

    / {3 q  @( K& x/ c4 C5 |
液相色谱定量分析的步骤
1、选择一个适合定量分析的色谱方法:
  • 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
  • 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)# k8 q# ?; M8 H" \3 I6 U

    ! X9 [+ _( M7 \% V5 ^2 K
  • 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围! J8 s$ J& e  G0 b8 o4 ~; X

      v6 j* R' c& r  Y+ p% ^' u- v
2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线
0 W. l9 C& }( Y  H& l
3、考查定量方法的准确度及精密度# ^0 `3 J  G3 l
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
, \9 q" `- B/ J7 f鉴别需定量的色谱峰(定性)
3 V, Z2 h& {  v
定性鉴别每个要定量的色谱峰
' r& }+ N( I7 ]6 F
首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt),通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份,色谱定性是用与标样比较保留时间的方法,判据并不充分进一步的确认(定性)
1、标准加入法5 b5 {8 ?' h* [4 j
2、同时用其它方法:其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 (PDA:光谱图比较、谱库检索;MS:质谱图解析、谱库检索)3、其它仪器方法4 J! F4 l5 a2 M0 L  P2 d
确认定量峰的一致性

1 p$ A* G6 [2 z( S确认色谱峰的一致性(纯度)& w; S/ G- T+ A" r3 o% y
" a) B4 }( x( p6 e- i: D. c) |+ f
  • 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份
    8 ?) ]5 f, J- K

    4 U1 g+ K! C, d" g
  • 检查是否有共流出的物质(杂质)干扰6 S$ E0 O! n  r) _# J
    7 m. C2 H. q2 l
色谱峰一致性(纯度)确认的方法. k7 j' }# ~% ]! n( Y" o
  • 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
    + M' k# l7 k; U% p
    9 f. q$ [! n& X
  • 峰纯度鉴定2 C6 g; r$ M0 c$ X! Z

    6 M6 c& o6 P+ ]( N, L4 X9 f& R
  • 2996的纯度角理论

    ) H# h6 |8 t  _
常用的定量方法
2 o6 O3 C" o  U9 g, F# M1 F标准曲线法,分为外标法和内标法:
6 i( z* j% H& `, ^5 O- d7 G
; Y6 @1 {: l. R+ a. Z+ f
外标法:在液相色谱中用得最多
内标法:准确,但是麻烦,在标准方法中用得最多
影响定量分析结果的因素
准确度不好可能由下述原因造成:
–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确

2 R6 y9 z$ x- w! s9 Q' P
精密度不好可能的原因:
峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降
文章来源:百度文库

) s/ w' A% r8 M5 I1 W. q, ^( P
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沙发
gongcl 发表于 2015-5-22 10:12:33 | 只看该作者
谢谢分享                 
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