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[仪器分析] 【夯实基础】液相色谱定量分析原理

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楼主
xiaoxiao 发表于 2015-5-22 06:55:22 | 只看该作者 回帖奖励 |倒序浏览 |阅读模式

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本帖最后由 xiaoxiao 于 2015-5-22 06:57 AM 编辑
0 E3 Y+ ?( U& L. z0 w6 b* b8 Q【夯实基础】液相色谱定量分析原理8 _$ f9 h0 s' a1 n% k/ b* x
2015-05-21 仪器信息网# ^3 P" k6 ~' s& |/ b; b# Z
液相色谱定量分析原理/ c' g* P& u( u4 b3 \( \
在定性的基础上定量,需有纯物质作为标准物液相色谱定量是相对定量的方法:即由已知量的纯标样推算混合物中被测物的量定量的依据是:9 x3 v5 C2 q1 N8 D( I2 m
  • 被测组分的量与响应值(峰高或峰面积)成正比
    / G) Z' A( V- i0 h) e) N
  • 由已知量的标样可求得定量校正因子
    0 t, Y$ p+ l; f: N4 Z7 \
  • 定量校正因子:是定量计算公式中的比例常数,其物理意义是单位响应值(峰面积)所代表的被测组分的量
    $ @$ z% R' |6 K) k/ `8 e8 E
  • 测定未知组分的响应值,通过定量校正因子即可求得其含量

    4 e4 b) N  z8 c9 M  \
液相色谱定量分析的步骤
1、选择一个适合定量分析的色谱方法:
  • 确认被检测组分峰,并达到分离度(R)大于1.5
  • 确定被测组分色谱峰的一致性(纯度)
    7 K6 d2 X2 Q7 m: ~4 d+ U
    - L) G; T8 I! m1 Q1 g  Y
  • 确定方法的检测限及定量限;灵敏度及线性范围6 ^- |+ A7 i8 {1 v5 X
    7 ]; L: T# s( `
2、用不同浓度的标准样品建立校正曲线8 x! i# S, _, Z) k! _& L9 T
3、考查定量方法的准确度及精密度; f2 o) a3 `- x0 T
4、用相应的色谱管理软件实施样品采集,数据处理及报告结果
3 R8 l/ P) Y$ J, ]; L0 E1 Z; _鉴别需定量的色谱峰(定性)
: A" H2 t2 M; d; K
定性鉴别每个要定量的色谱峰
# c) r2 F8 _7 _; k# g" u& i- v' [6 g
首先用标样确定欲定量之色谱峰的保留时间(Rt),通过比较保留时间,找到未知样中各色谱峰所对应的组份,色谱定性是用与标样比较保留时间的方法,判据并不充分进一步的确认(定性)
1、标准加入法
5 O2 _5 C- X9 A1 h
2、同时用其它方法:其它色谱方法(改变机理,如:用不同的色谱柱) 、其它检测器 (PDA:光谱图比较、谱库检索;MS:质谱图解析、谱库检索)3、其它仪器方法3 t1 f8 V! h4 f8 ?6 J/ h
确认定量峰的一致性

3 {( L3 K, h8 F- D) v" n* o% T9 h# p确认色谱峰的一致性(纯度)$ e! l4 H; S0 @4 c

) B' h, {4 J! ?( p6 o4 ~- o
  • 保证每个色谱峰下只有一个被测的组份" b- I' \5 e  A  d
    5 ]9 ~+ H$ V( ]/ u
  • 检查是否有共流出的物质(杂质)干扰0 r2 L, s) k& }* K/ \1 r/ I
    : b, Y1 [; e' s' B' {! |. j( Q) H
色谱峰一致性(纯度)确认的方法  F: M* V5 J0 @; Z- S( \
  • 用光电二极管矩阵(PDA)检测器比较光谱图
    0 `6 H6 z  y! F4 Y; R/ a3 S
    2 u& h! Q* p3 ~. B8 v2 E6 j2 ?
  • 峰纯度鉴定
    ; y7 F7 X9 v: m' b, ]

    7 i% g. i- ]- k* G! m: K: c: }
  • 2996的纯度角理论

    ' {! Z+ \4 }# q/ U5 D
常用的定量方法9 l2 k! q2 \3 o4 w) E( ]3 l8 v, z# U
标准曲线法,分为外标法和内标法:
2 ]4 S& @: T, l  X) @3 u; z
. }4 E+ v- Y3 }0 l0 x, _# x
外标法:在液相色谱中用得最多
内标法:准确,但是麻烦,在标准方法中用得最多
影响定量分析结果的因素
准确度不好可能由下述原因造成:
–峰面积积分不正确、样品分解或制样时导入杂质、样品瓶不密封,样品或溶剂挥发、制样不正确、进样问题、内标制备不正确
3 b( U. ~/ o4 X1 i; t
精密度不好可能的原因:
峰积分不正确、进样或进样器有问题、样品分解或制样时引入了杂质、色谱问题、检测器响应下降
文章来源:百度文库
$ t; y1 V2 c7 y' A' H
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沙发
gongcl 发表于 2015-5-22 10:12:33 | 只看该作者
谢谢分享                 
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