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一、含量方法学研究所需图谱(流动相、检测限和定量限参照有关物质,如有关物质和含量方法一致,可以只做进样精密度、溶液稳定性)
) B1 ^9 _' R, V9 F2 I1、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r.0.999。
/ x5 h% A9 A" Q+ [# X: G ?2、进样精密度:用对照品做,单样连续进六针,要求RSD<2.0%。 q$ G' r+ q8 e+ ]
3、重复性试验:双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<2.0%。
) t( u. I; Q! `. W2 {' [3 J0 `4、回收率(准确度):总共22针,分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在98%~102%之间,RSD<2.0%。8 o2 G% h1 `- R' W5 P2 g
5、含量测定:总共28针,方法验证—两个对照品四针,仿制品两个样四针,小试样品两个样四针。中试样品三批—两个对照四针,一批双样四针,三批六个样十二针。
( s$ n" D3 \. A6 S+ U6、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。2 p/ X; J0 B3 J
7、专属性:空白辅料、空白溶剂、正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。2 P" f6 n9 L: e+ F0 M1 H
8、稳定性试验:包括加速0、1、2、3、6月30、40℃,长期3、6、9、12、24月,均做含量测定和有关物质。含量测定双样双针,一样两针,一批两样,三批六样十二针,两个对照四针。有关物质做空白+ ]$ }, H( P& m
溶剂,单样单针,100%样品、1%自身对照,共七针。
( x5 n; h$ K2 n9 _二、有关物质方法学研究所需图谱! b- U V+ u5 u+ C/ N
1、波长扫描和流动相的选择:参照国家标准并根据欧洲药典、USP英国药典以及日本药典中收载的流动相做,取样品,配成一定浓度进样,进行比较确定,选取其中最合适的。确定流动相后,并驱样品、对照品以及国外上市样品,配成参考文献中的浓度,进样;
9 i3 g7 p4 B7 Y' n) g% v9 ]要求:分离度达1.5以上,分析时间通常为主身份保留时间的2-3倍,分析时间长可考虑采用梯度洗脱,共 n+3张图谱
& q- J! l. B1 l9 G" K$ L4 ~系统适用性试验:配制6份相同浓度的杂质溶液进行分析,该杂质峰峰面积的相对标准差应不大于2.0%,保留时间的相对标准差应不大于1.0%。另外,杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,理论塔板数应符合质量标准的规定。(已知杂质)
1 K i4 J3 Q3 ]7 F1 _4 p9 |耐用性:分别考察流动相比例变化±5%、流动相pH值变化±0.2、柱温变化±5℃、检测波长变化±5nm、流速相对值变化±20%以及采用三根不同批号的色谱柱进行测定时,仪器色谱行为的变化,每个条件下各测试两次。可接受的标准为:各杂质峰的拖尾因子不得大于2.0,杂质峰与其他成分峰必须达到基线分离;各条件下的杂质含量数据(n=6)的相对标准差应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内。) J0 [ _8 n4 z7 J( a( ]
2、空白溶剂以及辅料干扰试验:取溶解样品用的溶剂,注入液相色谱仪,记录色谱图。观察溶剂图谱情况。并取样品、处方量的空白辅料按同样方法配成一定的浓度,进样,记录的谱图。看辅料是否有干
/ i) b$ Y* \, A& p H扰。共三张图谱,辅料吸收峰面积相对于主峰<0.05%视为无干扰。 杂质定位:如有已知杂质并且杂质对照品可获得的,配制杂质对照溶液,进样,记录色谱图。共四张图谱。
: |5 w1 e+ F6 W/ Z) @3、专属性:正常样、热破坏样、酸破坏样、酸液空白样、碱破坏样、碱液空白、光破坏样、氧化破坏样、双氧水空白样。共九针,需达到降解约20%,该杂质峰与其它峰应能完全分离,分离度不得小于2.0(已知杂质)。
: \% z7 d& m, Y4 h' M2 d4、检测限与定量限:检测限用稀释法—12个样12针。配制6份最低定量限浓度的溶液,所测6份溶液杂质峰保留时间的相对标准差应不大于2.0%,峰面积的相对标准差应不大于5.0%。检测限S/N>3,定量限S/N>10。; |* N1 U2 W/ K5 r
5、回收率(已知杂质):分别做三个80%、三个100%、三个120%,一个样两针,两个对照四针,九个样18针,要求回收含量在80%~120%之间,RSD<2.0%。各浓度下的平均回收率均应在80%-120%之间,如杂质的浓度为定量限,则该浓度下的平均回收率可放宽至70%-130%,相对标准差应不大于10%。
% ~3 \( n0 G+ z W T8 }6、线性:包含60%、80%、100%、120%、140%,通常是5~7针,要求r>0.999。截距在100%响应值的25%以内,响应因子的相对标准差应不大于10%。
, X% e* T& o( d7、1%精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。8 O& V$ p4 u, } u7 {9 c4 L6 b
8、重复性试验(已知杂质):双样双针,一个样进两针,六个样,两个对照,总共16针,要求RSD<15.0%。7 q/ G8 ?- ]4 K! E9 I4 k
9、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。按照分析方法分别配置对照品溶液与供试品溶液,平行测定两次主成分与杂质的含量,然后将上述溶液分别贮存在室温与冰箱冷藏室(4℃)中,在1、2、3、5和7天时分别平行测定两次主成分与杂质的含量。可接受的标准为:主成分的含量变化的绝对值应不大于2.0%,杂质含量的绝对值在±0.1%以内,并不得出现新的大于报告限度的杂质。* r V! g9 K" q+ ]5 ? B! j
10、小试方法验证及被仿制品:被仿制品1%自身对照,被仿制品100%样品,小试100%,小试1%自身对照。方法验证:中试样品三批,100%样品和1%自身对照,空白溶剂。
( F- R2 h3 N$ @# H0 G8 p; U11、注明:主峰图谱要求——拖尾因子0.95≤r≤1.05,分离度最好要求1.5,理论板数一般不低于3000.(个别品种需根据实际要求而定)。
+ p* \7 m* c3 T6 O( S) t$ w/ k9 r# S三、聚合物方法学研究图谱
T5 B3 {. [/ k1系统适应性试验(水和磷酸盐缓冲液):蓝色葡聚糖2000和对照品,理论塔板数要求不低于700。
: P! G2 H! ^# w8 S c2、空白辅料
) I$ H$ q3 B: c8 n3、供试品
( N+ b. ~1 z4 n+ A8 T: Z5 y4、专属性试验:供试品,辅料干扰。3 A. m: m( N! k$ t) j7 b
5、检测限与定量限:般以信噪比3:1相应浓度确定最低检测限,以检测限×1000的量或浓度作为测定量(浓度)
- u3 j8 p5 ^& I. u% e6、1%进样精密度:单样连续进六针,要求RSD<2.0%。: K0 n y% ^& x+ b, d) _
7、溶液稳定性:单样单针,分别0h、1h、2h、4h、6h、8h,RSD<2.0%。0 \5 {% J: z$ H0 o( f
8、线性:(浓度范围20%-200%)7个样。
t, F* [' u. b' c# O W Y供试品溶液的浓度与聚合物测定结果的相关性考察:制备系列的供试品溶液,浓度范围为规定浓度的50%~200%,共三份样品,以测得的高聚物峰面积对溶液浓度进行线性回归,相关系数r应大于0.99。 F值测定的重现性考察:F值为对照溶液的浓度(mg)与测得的峰面积的比值,要求日内、日间的相对标准偏差在5%以内。8 H* L) `" c1 g: ~6 w2 l
对照品0 a. e7 ?5 m+ |5 A1 a
20%- r {; e0 N1 C# X- I% q0 Y' S5 ^
50%% J5 b3 l( W0 y: m1 D' t
80%
( F1 |0 I2 E9 V. S j/ l100%) n6 z+ k8 Z K, \1 D
120%
$ @% y" n/ N6 `: w8 A150%3 {3 O6 v* g6 S2 k9 T
200%+ Y4 m9 V8 H4 N, a
9、聚合物测定(方法验证)$ X3 G( h( t; X& @1 j# V( V1 E
四、影响因素五天和十天:分别作含量测定和有关物质" B- f2 h( \- Y( ^( Q: c/ Y6 [: v& L
含量测定双样双针,一样两针,高温,高湿,强光、对照品。 有关物质单样单针,100%样品、1%自身对照,空白溶剂。
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