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标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则 [打印本页]
作者: 静悄悄    时间: 2017-9-7 02:07 PM
标题: 方法开发缓冲盐选择指导原则
前言# [) S4 ?3 g. z9 o
液相方法很多用到缓冲盐，我在从事研发工作的过程中，发现很多同仁对缓冲盐在液相方法中的应用不是太了解，遂分享一部分我的看法，抛砖引玉，相互交流。  h/ M8 z* A' Z1 w* e2 z

1 J7 O/ o' W( W6 c* h4 k: x# Q! A适用范围
9 Q0 }6 v5 K; h3 ]* S+ w7 ^! I  n- z; E
本指导原则仅适用于反向色谱与离子对色谱方法开发过程。
4 v# N7 P. D' r何时应用缓冲盐？
( b8 I" P: ^) T/ r% @9 |& Z, `) k, z5 O- V6 @# T2 v: X4 E
样品或样品中需研究的关键杂质有离子化倾向，其他特定少数情况另行叙述。
' J  p6 i1 y: {' |* Y存在较强离子化倾向的组分，其中一部分是分子状态，与反相色谱固定相结合的更好；另一部分是离子状态，更亲和于流动相。如不使用缓冲盐控制其电离状态，即分子状态和离子状态的比例，很容易出现峰拖尾分叉变形的情况。这种情况下一般就不应该使用水/有机相系统作为流动相，应选用缓冲盐/有机相系统。
! D9 {7 u0 z4 Q缓冲能力与pH选择
) [( v. R! _' Q$ f* @
$ `8 [5 H' \; G# }! m2 S* {流动相如用到缓冲盐溶液，其应当有一定的缓冲能力，如果减少进样量，峰形改善，则说明很可能缓冲盐溶液缓冲能力不足。缓冲盐溶液的缓冲能力与缓冲盐浓度、缓冲盐溶液的pH值相关。缓冲盐浓度越大，缓冲能力越强；缓冲盐溶液的pH值越接近其pka，缓冲能力越强。一般缓冲盐溶液的pH值应在其pka±1的范围内，为了确保主成分的保留时间不因pH值的微小变化产生大的偏离，缓冲盐溶液的pH值应在样品pka±2的范围外。& z9 |( Z0 g: R/ p1 R5 y+ q" k! [$ e
, v+ I% Q2 Q0 C' \, ?, H
截止波长
6 S3 v. W5 x0 _, ]  A- y/ E* x% ]
每种缓冲盐都有其对应的截止波长，方法的检测波长不得小于缓冲盐溶液的截止波长。检测波长越接近流动相截止波长，基线噪音越大，响应值误差越大，组分响应值和灵敏度变小。
' P0 }% O$ C2 O- P$ C常用缓冲盐pka与截止波长列表
' p" \! _4 z% B' v/ {1 n, [" R' L2 N( q( F* t
缓冲盐
pka
缓冲范围
截止波长
磷酸盐
2.1
＜3.1
＜200nm(0.1%)
7.2
6.2-8.2
12.3
11.3-13.3
甲酸盐
3.8
2.8-3.8
210nm（10mM）
乙酸盐
4.8
3.8-5.8
210nm（10mM）
碳酸盐
6.4
5.4-7.4
＜200（10mM）
三乙胺
11.0
10.0-12.0
＜200（10mM）
三氟乙酸
≥2
1.5-2.5
210nm(0.1%)

2 C0 W2 C  q4 T, i* k1 b% |, u缓冲盐应用一般思路
" }1 Q1 c. ~# u; P" l7 g" |- D
/ h/ J- ^) ^# @' @4 C8 Z! L1、 缓冲盐浓度一般为10-50mmol/l。根据样品性质及进样量选择缓冲盐浓度，使其满足应有的缓冲能力。( {2 X, l' ~# g. j$ \
! d  G1 h1 o. P, T, B& k5 N0 f+ g
2、 梯度洗脱中有机相比例允许的最高值，应根据缓冲盐与有机相混溶实验确定。取不同缓冲盐-有机相比例，确定有机相比例允许最高值，如缓冲盐：有机相为10:90、20:80、30：70等不同比例。不得在仪器上随意设置高比例有机相，以防缓冲盐析出损坏仪器。
* q) `( O  W- J9 w
* @' y  x+ u1 X, ]. t, b+ ?3、 根据截止波长、pH值和缓冲能力等多个约束条件选择缓冲盐，如检测波长在末端吸收，则一般应选用磷酸盐。
* h  I5 V0 r  {9 A5 A
! w: F6 W! I" `4 q9 E* Z4、 常用缓冲盐溶液有：0.1%磷酸/三氟乙酸/乙酸/甲酸溶液，0.02-0.05mol/l 磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH至3.0）等+ i+ U) ?7 x9 U) l

) l8 `6 P  K% Y8 b6 U7 [ 5、碱性化合物优选钾盐，抑制拖尾效果更好。1 M# I% D5 ~8 p8 L

9 r2 y" W! e! Y6 [% y
" S8 f9 u$ K$ c   作者：占小兵 上海博志研新药物技术有限公司
% \& [$ k* K$ R0 |2 D3 x: h. D7 Q3 a
作者: qqpsly    时间: 2017-9-7 07:31 PM
已学习，感谢分享！！
作者: 18296788742    时间: 2024-6-4 03:32 PM

8 e" D2 k# b9 ^1 ^! ~$ A& |( q. Y. b* k已学习，感谢分享！！



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