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标题: 高效液相色谱仪操作、日常维护保养 [打印本页]

作者: 静悄悄 时间: 2016-8-17 07:40 AM
标题: 高效液相色谱仪操作、日常维护保养

1．所有流动相必须过滤和超声，若流动相为有机系和水系时必须分别对其过滤后绲合到一起超声，有机相超声15分钟，水系超声20分钟，绲合到一起超声15分钟。

2．泵头单向阀污染清洗，长期使用仪器或流动相被污染时极易使单向阀污染，单向阀污染判别：将在线过滤头提离流动相液面，将放空阀旋钮拧松，运行泵。此时在入液官中进入一气泡，马上将在线过滤头放入流动相内，然后将放空阀旋纽拧紧，以管察气泡行程，a.若气泡往前走又向后退，说明下单向阀污染，将下单向阀取下后放入丙酮中超声即可（超声时要让单向阀保持坚直状态）。

B若气泡往前走，但行程比防空阀旋纽拧松时慢，说明上单向阀污染，即将上单向阀取下后放入丙酮中超声即可（超声时要让单向阀保持坚直状态）。

3.泵头清洗，位于泵头后部的两根四氟液路管为清洗管，若流动相中含有盐类物质时，必须对泵头进行清洗，清洗步骤如下：a.将一根清洗管放入到过滤过的蒸馏水瓶放在高处。B用针管吸另一根清洗管党有水滴出时将其放在一空瓶中，空瓶放在低处。

c.在实验过程中一直对泵头进行清洗直到实验完成。

4若泵运行中压力突然上升，说明液路有堵的地方，检验方法遵循从后往前原则，逐段拆下后，若压力下降说明此段堵塞，个更换即可。

5.安装单向阀时要确保方向正确

6.泵的流量校正值不能随意改动

7.若柱的填充物为C18，流动相为

a. 水+盐时，在做实验的过程中必须同时用蒸流水清洗泵头。

作完试验后，将流动相换为水以0.7mI/min走柱子40分钟后，

再换用甲醇为流动相以0.7mI/min走柱子30分钟。在下次流

动相仍为水+盐时，应先用蒸馏水走柱过渡，在换成流动相走

b. 甲醇+水+盐时，在作试验的过程中必须同时用蒸馏水清洗

泵头。做完实验后，将流动相换为水以0.7mI/min走柱子40分钟后，再换用甲醇为流动相以0.7mI/min走柱子30分钟后。在下次流动相仍为水+盐时，应先用蒸馏水走柱过渡，再换成流动相走

c. 甲醇+水，作完试验后，换用甲醇为流动相以0.7mI/min走柱子

e. 30分钟。

b.甲醇+水酸时，作完实验后，将流动相换为水以0.7mI/min走柱子40分钟后，再换用甲醇为流动相以0.7mI/min走柱子30分钟后。在下次流动相仍为水+盐时，应先用蒸馏水走柱过渡，再换成流动相走

8.当换为正相柱时，必须先用异丙醇清洗液路管一小时后，再换为正相流动相走液路二十分钟后换上正相柱作实验，试5验完后用正己烷清洗柱子。

9.当液路中存在气泡时，检测起的吸收值会显示有很大的跳动，

同时工作站的基线会呈现不稳的情况；这时先检查整个系统有无

漏液的地方，如没有再把流通池进液口和出液口的螺钉拧，防

止密封不严造成漏气。在系统已经进气的情况下，先把流动相进

行超声除气；另外在检测器的出液端反压管上间歇性的加反压，

这样可以把流通池中的气泡排出。

10.在工作站上的基线如果呈现上下跳动的情况，但是检测器的

吸收值没有很大的变化，可能是修改检测器中“RNG”的设置值，

此设置值出厂时为“1”；当已经修改需要调整回初始值时，可以

先按检测器的键盘上的“RNG”键，在“RNG”菜单界面内将光

标移向数值出，连续按数字“1”.“3”，即可将“RNG”值修改

为“1”。

操作制定文件：

目的：制定规范的高效液相色谱仪操作、维护保养和清洁规程。

范围：适用于Agilent 1260 HPLC。责任：色谱检验工程师负责本规程执行。

内容：1 开机1.1 打开电脑。

1.2 打开液相色谱各个模块的电源。

1.3 双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面。

1.4 排气：

1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。

1.4.2 右键单击“泵”图标区域，选择“方法…”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min），点击“确定”。

1.4.3 右键单击“泵” 图标，点击“控制…”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止。

1.4.4 右键单击“泵” 图标，点击“方法…”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀。

1.4.5 右键单击“泵”图标，点击“方法…”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min。

1.4.6 同理右键单击“柱温箱”，“检测器”图标，点击“方法…”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。

2 编辑方法

2.1 点击“方法”－“编辑完整方法”开始编辑完整方法。

2.2 选中除“数据分析 ”外的三项，进入下一选项卡。

2.3 方法信息：在“方法注释”中加入方法的信息（如：This is for test!）。进入下一选项卡。2.4 泵参数设定：在“流速”处输入流量, 如1.0ml/min，停止时间：如10 min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，如乙腈：水＝75：25，A为水，B为乙腈，则设置B：75％即可。进入下一选项卡。

2.5 自动进样器参数设定: 选择“洗针进样”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。

2.6 柱温箱参数设定: 在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度。进入下一选项卡。

2.7 UV检测器参数设定: 在“波长”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm。点击确定。

2.8 在“ 运行时选项表 ”中，选中“ 数据采集”，点击“确定”。

2.9 从“方法”菜单，选中“方法另存为…”，输入一方法名，如“测试”，点击“确定。

3 单次采集

3.1 从“运行控制”菜单中，选择“样品信息”选项，选择合适的路径，在“数据文件”中选择 “前缀/计数器”，输入样品瓶的位置，点击“确定”。

3.2 基线平稳后约10分钟，从“运行控制”菜单中选择“运行方法”。

4 多次数据采集

4.1 按照步骤2 编辑完整方法。

4.2 点击“序列”－“序列表”，输入“样品瓶”“样品名称”，“进样次数”，选择合适的“做样方法”

4.3 点击“序列”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间”为名称的文件夹保存数据），数据建议以选择 “前缀/计数器”保存。

4.4 从“序列”菜单，选中“序列另存为…”，输入一序列名，如“测试”，点击“确定。

4.5 从“运行控制”菜单中选择“运行序列”。

5 数据分析（脱机状态使用）

5.1 双击“仪器 —脱机”图标进入的脱机画面。

5.2 从“视图”菜单中，点击“数据分析”进入数据分析画面。

5.3 从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名。点击“ 确定”，则数据被调出。（如预建立标准曲线，应先打开浓度较低的标样图谱。）

5.4 做谱图优化：从“图形”菜单中选择“信号选项”。从“范围” 中选择“满量程” 或“自动量程” 及合适的时间范围或选择“自定义量程” 调整。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“ 确定”。

6 积分:

6.1 从“积分”菜单中选择“积分事件”选项，选择合适的“斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”。点击，自动加载积分参数。

6.2 点击左边“√”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件”。

6.3 如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。

7 标准曲线

7.1 点击“校正”－“校正设置”，输入“含量单位”。

7.2 点击“校正”－“新建校正表”，点击确定。输入“化合物名称”和“含量”，点击“确定”，按照提示删除其他组分。

7.3 至此完成单级校正，如要增加校正级别，应从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正”－“添加级别”，点击确定，输入“含量”，依次增加校正级别。

8 打印报告

8.1 从“报告”菜单中选择“设定报告”选项，点击“定量结果”框中“定量”右侧的黑三角，选中“外标法”，其它选项不变，点击“ 确定”。

8.2 从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上，则点击“报告” 底部的“打印”钮。

8.3 点击“文件”－“另存为”－“方法”，把数据分析方法保存，下次分析可直接在“文件”－“调用”－“方法”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法，标准曲线方法和打印报告方法）

9 关机

9.1 关机前，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中）

9.2 退出化学工作站，依提示关泵，及其它窗口，关闭计算机。

9.3 关闭Agilent 1260各模块电源开关。

10 其它注意事项

10.1 当样品运行时，切勿打开自动进样器前遮盖，否则进样过程停止。

10.2 系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样，状态指示灯为红色。检查擦干并安置好漏液处，擦干漏液传感器，单击ON按钮，系统重新初始化。

10.3 注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。

来源：网络汇总

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