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标题: 安捷伦1200液相操作规程 [打印本页]
作者: dhj1975 时间: 2014-4-28 12:39 PM
标题: 安捷伦1200液相操作规程
Agilent1200高效液相色谱仪操作规程
一、Agilent1200化学工作站开机顺序(LAN卡联接)
1、将待测样品按要求前处理，准备HPLC 所需流动相，检查线路是否连接完好，废液瓶是否够用等
2、打开计算机，进入Bootp；
3、打开主机各模块电源（不分先后），等待Bootp接收,等待各模块就绪后,再双击工作站图标,进入化学工作站；
4、调出一个分析方法，检查各参数的设置；
5、旋开泵上的排气阀，将工作站中的泵流量设到5ml/min，溶剂A设到100%；
6、在工作站中打开泵，排出管线中的气体数分钟；
7、依此切换到B、C、D溶剂分别排气；
8、将工作站中的泵流量设到1ml/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；
9、关闭排气阀，检查柱前压力；
10、待柱前压力基本稳定后,打开检测器灯，观察基线情况；
二、数据采集方法编辑
1 由运行控制进入样品信息，设定操作者姓名，样品数据文件名等。
2自动进样器参数设定:
1）选择合适的进样方式, “StandardInjection”----只能输入进样体积，此方式无洗针功能。“Injection with NeedleWash”----可以输入进样体积和洗瓶位置，“UnRegistered”--此方式针从样品瓶抽完样品后，会在洗瓶中洗针。“Useinjectorprogram”---可以点击“Edit ”键进行进样程序编辑。
2)单击确定进入下一画面。
3 泵参数设定：（四元泵）
1）在流量（Flow）处输入流量,如1.5ml/min，在溶剂 B处输入70.0,(A=100-B-C-D) ,也可插入一行时间列表（Timetable） ,编辑梯度。在最大压力极限处（Pressure LimitsMax）输入柱子的最大耐高压，以保护柱子。
2）单击确定进入下一画面。
4 柱温箱参数设定:
1）在柱温下面的方框内输入所需温度,并选中它,点击更多键,选中与左侧一致，使柱温箱的温度左右一致。
2）单击确定进入下一画面。
5 DAD检测器参数设定:
1）在波长下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm,在峰宽 (响应时间)下方点击下拉式三角框,选择合适的响应时间, 如>0.1min(2s)。
2）在时间列表中可以插入一行，输入随时间切换的波长，如1min，波长=300nm。
3）点击确定进入下一画面。
6 单击方法菜单，选中保存方法，输入一方法名，如“test”，单击确定。
7、运行序列：新建序列，在序列参数中输入样品信息，在序列表中输入样品位置，方法等，运行该序列，等仪器就绪，基线平稳，从方法菜单中选择运行方法，进样。
三、数据处理操作步骤
1 由主菜单上的视图进入数据分析，到数据处理界面；
2 由主菜单上的文件进入调用信号，调出要分析的数据文件色谱图；
3 由主菜单上的图形进入信号选项，调整谱图坐标:
1)点自定义量程，在时间范围中输入横坐标(时间）(例如0到10)；
2)在响应范围:中输入纵坐标(响应值）(例如-50到800)；
3)在量程框中，调到全部使用相同量程；
4)点击确定退出。
4 由主菜单上的积分进入积分事件，设置、修改积分参数；
1)在斜率灵敏度后，输入斜率值；
2)在峰宽后中，输入最小峰宽值；
3)在最小峰面积后，输入最小峰面积值；
4)在最小峰高后，输入最小峰高值；
5)点击左上方带钩的图标，确认；
5 由主菜单上的报告进入设定报告，设置报告参数：
1)在定量结果栏中，选择计算（面积百分比，外标法，内标法等）；
2)在目标栏，选打印机打印，或屏幕打印；
3)点击确定退出。
6 由主菜单上的报告进入打印报告，打印报告；
四、关机
1 关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5—1ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
2 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机（用shutdown关）。
3关闭Agilent 1200各模块电源开关。
五、Agilent 1200 高效液相色谱仪维护保养：
1 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯；
2 开机时，打开排气阀，100%水，泵流量5ml/min，若此时显示压力 >10bar，则应更换排气阀内玻璃料。
3流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
4流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10-15min。
5配制90%水+10%异丙醇，以每分2—3滴的速度虹吸排出，进行seal-wash，溶剂不能干涸。
6当使用缓冲溶液时，要用水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次，每次数毫升。
7色谱柱长时间不用，存放时，柱内应充满溶剂，两端封死（乙睛/甲醇适于反相色谱柱，正相色谱柱用相应的有机相）。
1. 开机
1.1 打开计算机，输入用户名和密码，进入Windows XP画面。
1.2 打开1260 LC 各模块电源(不分先后)。待各模块自检完成后，双击“仪器1联机”图标，化学
工作站自动与1260 LC通讯，进入工作站。（注意：在“仪器1脱机”关闭的情况下，“仪器1联机”方能打开。）
1.3 从“视图”菜单中选择“方法和运行控制”画面，来调用所需的界面，正常情况会默认进入此界面。
1.4 确保对应溶剂瓶装入所要使用的流动相，左击“四元泵”模块下的“溶剂瓶”图标或右击“四元泵”下选择“瓶填充”，输入溶剂的实际体积和瓶总体积，可输入停泵的体积。单击“确定”。 （注意：此操作很重要，以免气泡进入系统）。
1.5 轻轻旋开泵上的冲洗阀（缓缓旋开约1/4即可，不可用力太过）。右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量，从0 ml/min 逐渐变为3ml/min，溶剂A设到100%；单击“确定”。右击“四元泵”图标，选择“控制”选项，选中“打开”，单击“确定”，则系统开始排气，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止；切换到通道同法继续排气，直到所有要用通道无气泡为止（只需排所用到的通道即可）。
1.6 右击“四元泵”图标，出现参数设定菜单，单击“方法”选项，进入泵编辑画面。设流量为：0ml/min，单击“确定”，轻轻关闭排气阀（旋紧即可）。
2. 数据采集方法、系列编辑：
2.1. 编辑完整方法：
2.1.1. 从“方法”菜单中选择“编辑完整方法” 项，选中除“数据分析 ”外的三项，单击“确定”，进入下一界面“方法注释”。
2.1.2. 方法信息：
在“方法注释”中写入方法的相关信息。此项可忽略不写，单击“确定”，进入下一界面“选择进样源/位置”。
选择“Als”的进样方式，单击“确定”，进入下一界面“设置方法”。
2.1.4. 方法参数设定：
在“设置方法”界面选择“四元泵”选项，在“流量”处输入所需流量，如：1ml/min，在溶剂“B”、“C”、“D”处输入流动相所占比例(A=100-B-C-D)，也可在右侧“时间表”项下选择“添加”，编辑梯度。在“停止时间”项下输入样品运行时间，在“压力限值”输入柱子的最大耐高压，如400bar，以保护柱子。
选择“进样器”选项输入进样体积。
选择“TCC”选项，在左侧输入所需温度或选“不控制“，选中“和左侧相同”---使柱温箱的温度左右一致。
选择“VWD”选项输入检测波长，一般选择最大吸收处的波长；该仪器只能设一个波长。
以上各项编辑完后，单击“确定”，进入下一界面“运行时选项表”。
进入“运行时选项表”选中“数据采集”和“标准数据分析”，单击“确定”。
2.1.5. 保存方法：
方法编辑完，在“方法” 菜单中选则“方法另存为”为新建方法命名，单击“确定”。
2.2. 数据采集方法：
2.2.1. 序列参数编辑：
在“序列”菜单中选择“序列参数”，在弹出对话框中输入操作者名称，数据存储目录路径中的子目录，子目录即为数据图谱存储的文件夹，请认真填写，输入后，鼠标点击其他处，会自动弹出“E:\---不存在，要创建它吗？”单击“确定”，再选择“手动”或“前缀/计数器”。
2.2.2. 编辑序列表：
编辑序列表：在“序列”菜单中选择“序列表”，在表格中可进行“插入”、“剪切”、“复制”、“粘贴”、“追加行”等操作，表格中必须填写“样品瓶”、“样品名称”、“方法名称”、“进样次数”、“数据文件”、“进样量”等信息，其他信息可选择编辑。编辑完成后，单击“确定”。 在“序列”菜单中选择“序列模板另存为”，为新建序列命名。
2.2.3. 运行序列：
色谱柱安装完成后，在“仪器”菜单中选择“系统开启”或单击界面右侧绿色的“打开”快捷键，平衡色谱柱，等基线平稳，在“仪器”菜单中选择“运行序列”。停止采集数据选择“仪器”菜单中 “停止运行/进样/序列”。
3.1. 打开“仪器1脱机”。从“视图”菜单中，单击“数据分析”进入数据分析界面。
3.2. 从“文件”菜单选择“调用信号”，选中您的数据文件，单击“确定”。
3.3. 做谱图优化，从“图形”菜单中选择“信号选项”选项，根据自身需要选择合适项，如：从范围中选择自定义量程设置合适的时间范围和响应范围，或调整，反复进行，直到图的比例合适为止。
3.4. 积分:
从“积分”菜单中选择“积分事件”，设置合适积分参数 “斜率灵敏度”，“峰宽”，“最小峰面积”，“最小峰高”等项。点击“积分”菜单中“积分”， 则数据被积分。
如积分结果不理想，则修改相应的积分参数，直到满意为止。
单击左边“√”图标，将积分参数存入方法。
3.5. 打印报告:
从“报告”菜单中选择“设定报告”选项。选择需要的报告类型。
从“报告”菜单中选择“打印报告”，则报告结果将被打印出来。
4. 关机:
4.1. 关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5-1小时，流量0.5~1ml/min，再用100%有机溶剂冲0.5小时，然后关泵，（适于反相色谱柱）。[正相色谱柱用适当的溶剂冲洗]
4.2. 退出化学工作站，及其它窗口，关闭计算机。
4.3. 关闭全部电源，稳压器等。
5.1. 氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯；
5.2. 开机时，打开冲洗阀，100%水，泵流量3ml/min，若此时显示压力 >10bar，则应更换排气阀内过滤白头。
5.3. 流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌）。
5.4. 配制10%异丙醇，以每5分钟进行0.2分钟的自动seal-wash即可，用缓冲盐时必须开启seal-wash。
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作者: 一场梦 时间: 2014-4-28 04:46 PM
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